Биологические, физико-химические и молекулярно-генетические свойства герпесвируса сибирского осетра

• Автор: Щелкунов, Артем Игоревич
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1 ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность темы

1.2 Цель и задачи исследований

1.3 Научная новизна

1.4 Практическая значимость

1.5 Основные положения, выносимые на защиту

1.6 Апробация и публикация результатов работы

1.7 Личный вклад

1.8 Объем и структура работы

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Герпесвирусы рыб и вызываемые ими болезни
2.1.1 Герпесвирусы рыб, выделенные в культуре клеток
2.1.1.1 Герпесвирус американского канального сома
2.1.1.2 Герпесвирус лососевых 1 типа
2.1.1.3 Г ерпесвирус лососевых 2 типа
2.1.1.4 Герпесвирус карпа 1 типа
2.1.1.5 Герпесвирус некроза гемопоэтической ткани золотой рыбки
2.1.1.6 Г ерпесвирус карпа кои
2.1.1.7 Герпесвирус угря
2.1.1.8 Герпесвирусы белого осетра
2.1.2 Г ерпесвирусы рыб, обнаруженные с помощью электронной микроскопии
2.2 Филогенетический анализ герпесвирусов рыб
2.3 Классификация герпесвирусов
2.4 Заключение по обзору литературы
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы и методы
3.1.1 Материалы

3.1.1.1 Рыба
3.1.1.2 Кролики
3.1.1.3 Культуры клеток
3.1.1.4 Нормальные и гипериммунные сыворотки
3.1.1.5 Реактивы
3.1.1.6 Праймеры
3.1.1.7 Питательные среды, растворы и сыворотки
3.1.1.8 Лабораторное оборудование и принадлежности
3.1.2 Методы
3.1.2.1 Культивирование перевиваемых клеточных линий рыб
3.1.2.2 Вирусологические методы
3.1.2.3 Изучение биологических свойств герпесвируса
сибирского осетра
3.1.2.4 Изучение влияния физических и химических факторов на инфекционную активность герпесвируса сибирского осетра
3.1.2.5 Получение гипериммунных антисывороток
3.1.2.6 Определение титра вируснейтрализующих антител
3.1.2.7 Электронно-микроскопические исследования
3.1.2.8 Молекулярно-генетические исследования
3.1.2.9 Статистические методы
3.2 Результаты исследований
3.2.1 Выделение вируса от естественно больных рыб
3.2.2 Биологические свойства герпесвируса сибирского осетра
3.2.2.1 Патогенность герпесвируса для сибирского
осетра разного возраста
3.2.2.2 Патогенность герпесвируса для молоди карпа и
радужной форели
3.2.2.3 Клиническая и патологоанатомическая картина
герпесвирусной болезни сибирского осетра
3.2.2.4 Содержание герпесвируса в органах и тканях

экспериментально зараженных сибирских осетров
3.2.2.5 Уровень вируснейтрализующих антител в сыворотке крови переболевших сибирских осетров
3.2.2.6 Содержание герпесвируса в воде
3.2.2.7 Чувствительность к гсрпесвирусу разных культур
клеток рыб
3.2.2.8 Оптимизация условий культивирования
3.2.2.9 Содержание связанного с клетками и свободного герпесвируса,
испытание методов его освобождения из клеток
3.2.2.10 Сохраняемость герпесвируса в патологическом
материале при разных условиях хранения
3.2.2.11 Сохраняемость культурального герпесвируса с разным
содержанием СПК при 4°С
3.2.2.12 Сохраняемость культурального герпесвируса
с 20% СПК при разных температурах
3.2.2.13 Результаты тестирования герпесвируса сибирского осетра на
контаминацию посторонними микроорганизмами
3.2.3 Влияние физических и химических факторов на инфекционную активность герпесвируса сибирского осетра
3.2.3.1 Чувствительность герпесвируса к воздействию химических
агентов
3.2.3.2 Выживаемость герпесвируса в воде
3.2.3.3 Изучение термолабильности герпесвируса сибирского осетра
3.2.3.4 Устойчивость герпесвируса к кратковременному
замораживанию-оттаиванию
3.2.3.5 Сохраняемость инфекционной активности герпесвируса
в процессе лиофилизации
3.2.3.6 Фильтруемость герпесвируса через мембранные фильтры
3.2.4 Молекулярно-генетические свойства герпесвируса
сибирского осетра

[66, 106] последовательность этого гена пока определена лишь частично [120].
Для герпесвирусов осетровых обоих типов, икталуровых 1 типа, лягушек 1 типа и карповых 3 типа частично определена последовательность гена терминазы [106], которая отвечает за упаковку геномной ДНК в капсид [52]. Анализ нуклеотидной последовательности двух генов вируса (ДНК-полимеразы и терминазы) показал, что 7 герпесвирусных изолятов, выделенных от североамериканских осетров (белого и тупорылого), формируют две геногруппы из пяти, установленных для герпесвирусов рыб и амфибий (рис. 1) [106].

100Г SSHV

' IcHV

8? RaHV

Рис. 1. Филогенетическая дендрограмма, построенная по результатам анализа фрагмента генов ДНК-полимеразы (А) и терминазы (Б) для 6 герпесвирусов
низших позвоночных [106]
Герпесвирусы: AciHV-1 и AciHV-2 - осетровых 1 и 2 типов; CyHV-З - карповых 3 типа; IcHV-1 - икталуровых 1 типа; SSHV - 99-CAN - тупорылого осетра 2 типа; RaHV-1-
лягушек 1 типа.
К первой геногруппе отнесены изоляты: AciHV-1 [42], WSHV-03-CA (шт. Калифорния) [66] и WSHV-00-IT (Италия) [66]. Ко второй геногруппе отнесены изоляты: AciHV-2 (шт. Калифорния) [188], SSHV-99-CAN
(Канада), WSHV-99-ID (шт. Айдахо), WSHV-97-OR (шт. Орегон) [66]. Изоляты этих геногрупп различаются не только нуклеотидными