Безопасность и противоопухолевая активность кандидатного терапевтического препарата "Канцеролизин", созданного на основе делеционного аденовируса человека 5-го типа

• Автор: Вдовиченко, Галина Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 127 с. : 13 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Обозначения и сокращения

Введение

Обзор литературы

Злокачественные новообразования: генетические изменения в клетках, как основная причина возникновения опухолей Вирусные векторы как перспективный подход для разработки современных противоопухолевых препаратов Генная терапия

Вирусные векторные системы для суицидной терапии опухолевых клеток-мишеней

Вирусы, избирательно инфицирующие и лизирующие опухолевые клетки

Характеристика аденовирусов человека: аденовирусы как векторная система

Онколитические аденовирусы

Материалы и методы

Результаты собственных исследований
Исследование перевиваемой культуры клеток 293 как субстрата для производства кандидатного противоопухолевого препарата «Канцеролизин»
Получение препарата «Канцеролизин» и оценка показателей его качества
Доклинические исследования кандидатного противоопухолевого препарата «Канцеролизин»
Исследование генетической стабильности мутантного штамма адено-

вируса Ас1е12, входящего в состав препарата «Канцеролизин»
3.3.2 Исследование реактогенности препарата «Канцеролизин»
3.3.3 Специфическая онколитическая активность препарата «Канцероли-

3.3.4 Изучение сохранения активности препарата «Канцеролизин» при
хранении
4 Заключение
Выводы
Список использованной литературы
Приложение А. Проект экспериментально - производственного per- 139 ламента
Приложение Б. Проект фармакопейной статьи предприятия

Обозначения и сокращения
АОК - антителообразующие клетки
ГЗТ - гипсрчувствительность замедленного типа
ГНТ - гиперчувствительность немедленного типа
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА - иммуноферментный анализ
Кон А - конканавалин А
М - средняя величина
НТД - нормативно-техническая документация
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ТЦД5о - 50%-я цитопатогенная доза
ФГА - фитогемагглютинин
ФСГ1 - фармакологическая статья предприятия
ЦНС - центральная нервная система
ЭПР - экспериментально-производственный регламент
-ЯСК - ядросодержащие клетки
Ad5 - штамм VR-1516 аденовируса 5-го типа
Adel2 - название сконструированного мутантного варианта аденовируса,
который несет делецию фрагмента 2330-3406 п.о. гена Е1В55К и избирательно размножается на р53-дефицитных раковых клетках, вызывая их разрушение I95 - доверительный интервал средней для 95%-й вероятности
IgE - иммуноглобулины класса Е
IgG - иммуноглобулины класса G
M±Sm - среднее значение ± стандартное отклонение средней величины
HIV - вирус иммунодефицита человека
HSV - вирус герпеса человека

нов обычно не имеют рецепторов CD46 для вируса корн и исследования с использованием генетически модифицированных вариантов вируса кори показали удачный пример изменения тропизма вируса [Dorig et al., 1993; Naniche et al., 1993]. Последующие исследования показали, что эти модифицированные штаммы вируса кори сохраняли свою способность связываться с рецепторами CD46. Успехи в расширении тропизма вирусов, описанные выше, могут быть использованы при создании противоопухолевых препаратов на основе модифицированных вирусов кори, однако для достижения опухолевой селективности необходимо разработать подход по отключению способности вируса связываться с клеточным рецептором CD46 [Grote et al., 2001; Burns et al., 1993; Akkina el al., 1996].
Альтернативный подход по достижению опухолевой специфичности вирусов основан на использовании дефектов контроля цикла деления клетки, свойственных опухолевым клеткам. ДНК вирусы, такие как аденовирус, папилломави-рус или полиомавирус при их репликации в клетках продуцируют вирусные белки, которые удерживают инфицированные клетки в S-фазе, за счет чего обеспечиваются оптимальные условия для эффективной репликации вирусной ДНК. Механизм сохранения клеток в стадии деления связан с действием вирусных белков на клеточные белки pRb и р53, контролирующие цикл клеточного деления [Ncvins & Vogt, 1996]. Гипофосфорилированные формы pRb, присутствующие в клетке, находящейся в G1 или G2 фазах клеточного цикла, связываются с многочисленными транскрипционными факторами в основном из E2F семейства. Аденовирусный белок El А, папилломавирусный белок Е7 и большой Т белок вируса SV 40 конкурентно связываются с гипофосфорилированным pRb и таким образом вытесняют E2F, в свою очередь это позволяет клетке оставаться в состоянии S-фазы клеточного цикла [Nevins, 2001]. Клеточный белок р53 также обеспечивает переход клетки из состояния деления в фазу покоя (G). В отличие от pRb белок р53 не регулирует клеточный цикл клетки, он вырабатывается в клетке в случае повреждения ее ДЬ1К, запуская арест клеточного цикла и апоп-тоз [Bates & Vousden, 1996]. Аденовирусный белок Е1В-55К и папилломавирус-