Молекулярно-генетический анализ и биологическая характеристика полевых изолятов вируса лейкоза птиц, циркулирующих на территории Российской Федерации

• Автор: Плотников, Вадим Алексеевич
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 146 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Историческая справка

1.2. Характеристика ВЛП

1.2.1. Классификация

1.2.2. Морфология и физические свойства

1.2.3. Организация генома и свойства кодируемых белков

1.2.4. Репликация вируса

1.2.5. Устойчивость

1.2.6. Антигенные свойства
1.2.7. Культивирование
1.3. Генетическая вариабельность штаммов ВЛП
1.3.1. Сравнительный нуклеотидный анализ гена ет вирусных изолятов ВЛП подгрупп АЛ
1.3.2. Филогенетические отношения изолятов ВЛП
1.4. Клинические признаки
1.5. Паталогоанатомические и гистологические изменения
1.6. Эпизоотологические особенности ВЛП
1.6.1. Распространение
1.6.2. Вирусоносительство
1.6.3. Пути передачи
1.7. Методы диагностики ВЛП
1.8. Иммунитет
1.9. Меры борьбы и профилактики
1.10. Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы
2.1.1. Штаммы и изоляты вирусов ВЛП
2.1.2. Культуры клеток
2.1.3. Растворы и реагенты
2.1.4 Реагенты и наборы для молекулярной биологии
2.2. Методы
2.2.1. Сбор образцов
2.2.2. Приготовление культур клеток
2.2.3. Выделение и идентификация ВЛП
2.2.4. Выявление группоспецифического антигена р27 ВЛП в сыворотке крови кур методом ИФА
2.2.5. Выявление антител к вирусу лейкоза птиц подгруппыЛ
2.2.6. Определение стерильности
2.2.7. Замораживание клеток
2.2.8. Выделение суммарной РНК
2.2.9. Полимеразная цепная реакция, совмещенная с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР)
2.2.10. Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.2.11. Конструирование рекомбинантной плазмиды
2.2.13. Секвенирование амплифицированных фрагментов кДНК
2.2.14. Компьютерный анализ и сравнение первичных нуклеотидных последовательностей
2.2.15. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Мониторинг птицеводческих хозяйств на наличие ретровирусных инфекций на территории Российской Федерации
3.2. Разработка тест-системы на основе ПЦР для выявления и дифференциации вируса лейкоза птиц подгрупп А-О и Э
3.3. Изоляция и характеристика полевых изолятов вируса лейкоза птиц, циркулирующих на территории России в 2009-2011 гг
3.4. Определение и сравнительный анализ первичной структуры вариабельной области гена envelope изолятов вируса лейкоза птиц, выделенных на птицефабриках России в 2009-2011 гг
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

помощи пальпации обнаруживается увеличение печени, фабрициевой сумки и почек. Когда начинают развиваться клинические признаки, ход болезни становится быстрым [37, 38].
Эритробластоз. На инкубационный период влияет источник вируса, штамм вируса, доза, путь заражения, возраст и генетическая структура носителя. Основным определяющим фактором является наличие или отсутствие у вирусного штамма вирусного онкогена. Данный онкоген ативирует промоторную втавку клеточного онкогена с-егЬ В и, тем самым, индуцирует эритробластоз с длительным латентным периодом [82, 194, 217, 255]. Полевые штаммы и вирусы, пассированные в клеточной культуре, индуцируют эритробластоз после более длительного инкубационного периода [31]. Полевые случаи заболевания эритроблатозом наблюдаются у птиц после трехмесячного возраста [87, 195].
Самыми ранними симптомами являются заторможенность, общая слабость, а также легкая бледность или цианоз гребешка. При развитии болезни бледность или цианоз могут усиливаться. Как правило, наблюдается слабость, истощение и диарея. Кроме того, может наблюдаться обильное кровотечение из перевых фолликул. Продолжительность такого состояния измеряется от нескольких дней до нескольких месяцев. При сильной анемии, цвет гребешка может измениться от светло-желтоватого до почти белого [87].
Миелобластоз. Самым изученным штаммом вируса, вызывающим преимущественно миелоблатоз, является ВАКА. Штаммы являются дефектными и содержат вирусы-помощники подгрупп А и В [105]. После заражения восприимчивых однодневных цыплят большой дозой вируса изменения в крови могут наблюдаться через 10 дней. Пик смертности наступает приблизительно в течение одного месяца. После этого срока количество случаев гибели птиц намного меньше [64].
Симптомы миелобластоза схожи с симптомами эритробластоза. Сначало, появляется заторможенность, общая слабость и легкое побледнение