Создание и внедрение в промышленное птицеводство системы комплексного серологического мониторинга инфекционных болезней на основе иммуноферментного анализа

• Автор: Мудрак, Наталья Станиславовна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 386 с. : ил.

Список сокращений
АБТС-2,2 - азино-ди (З-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты)
диаммониевая соль Аг - антиген АТ - антитела
АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин
БН - болезнь Ньюкасла
БСА - бычий сывороточный альбумин
ДСН - додецилсульфат натрия
ИББ — инфекционная бурсальная болезнь
ИБК — инфекционный бронхит кур
илт — инфекционный ларинготрахеит
ИФ — реакция иммунофлюоресценции
ИФА — иммуноферментный анализ
ИЭП — инфекционный энцефаломиелит птиц
Мг - микоплазма галлисептикум
Мс - микоплазма синовиа
ОП - оптическая плотность
ОФД - ортофенилендиамин
пнп - позитивно-негативный порог
ПЦР — полимеразная цепная реакция
ПЭГ - полиэтиленгликоль
РДП — реакция диффузионной преципитации
РВП - реовирус птиц
РКЭ - развивающиеся куриные эмбрионы
PH - реакция нейтрализации
РТГА — реакция торможения гемагглютинации
вРБ - свободные от патогенной микрофлоры
ССЯ-76 - синдром снижения яйценоскости
ОГЛАВЛЕНИЕ

1.ВВЕДЕНИЕ
2.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Общая характеристика (морфология и химический состав, клинические признаки, иммунитет) возбудителей инфекционных заболеваний кур:
ньюкаслской болезни
гриппа птиц
инфекционной бурсальной болезни
инфекционного бронхита кур
респираторного микоплазмоза и микоплазменного синовита
синдрома снижения яйценоскости
инфекционного энцефаломиелита
реовируса птиц
2.2. Методы диагностики инфекционных заболеваний в птицеводстве
2.2.1. Методы индикации и идентификации возбудителей заболеваний в птицеводстве
2.2.1.1. Выделение вирусов
2.2.1.2 Идентификация с применением РГА, РТГА,
PH, ПЦР и электронной микроскопии
2.2.2. Методы ретроспективной лабораторной диагностики
2.2.2.1. Реакция нейтрализации
2.2.2.2. Реакция диффузной преципитации
2.2.2.3. Реакция торможения гемагглютинации
2.3. Иммуноферментный анализ
2.3.1. Общая характеристика: сущность метода,
варианты постановки, анализ результатов
2.3.2. Применение ИФА в диагностике инфекционных
болезней в птицеводстве
2.3.3. Обзор коммерческих наборов для серологической
диагностики
2.3.4. Новые технологии тестирования с применением ИФА
2.3.5. Контроль качества исследований с использованием

2.4. Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы
3.1.1. Материалы
3.1.2. Методы
3.2. Результаты собственных исследований
3.2.1. Разработка методов получения антигенов возбудителей НБ, ИБК,
ИББ, ССЯ-76, РВП, ИЭП, МГ, МС и ГП, контрольных положительных и отрицательных сывороток (получение вирусного сырья, инактивация, очистка и концентрирование, электронная микроскопия, электрофорез
вирусных белков)
3.2.1.1. Получение антигенов вирусов НБ, ГП, ИБК, ИББ,
ССЯ-76, РВП, ИЭП, микоплазм МГ, МС
3.2.1.2. Оценка активности и специфичности антигенов
3.2.1.3. Получение контрольных положительных и отрицательных сывороток
3.2.2. Разработка тест-систем для определения антител к выбранным возбудителям при тестировании сывороток в одном разведении.
3.2.2.1. Выбор рабочего разведения

Смертность обычно низкая и вызывается асфиксией, обусловленной блокированием нижней трахеи или бронхов пробками слизи [119].У несушек снижение яйценоскости, изменения в скорлупе и ухудшение качества яиц могут сопровождаться слабыми респираторными симптомами, иногда респираторная клиника отсутствует. Некоторые штаммы вызывают только изменения в окраске скорлупы. У кур, инфицированных вирусом ИБК штамма М41, вирусный антиген обнаруживался в эпителии яичников между 6 и 9 днями после заражения. [102].
Нефропатогенные штаммы вызывают первоначально респираторные симптомы с признаками почечных повреждений (повышенное потребление воды и жидкий помет). Несколько штаммов вируса ИБК изолированы из железистого желудка, двенадцатиперстной кишки, тонкого кишечника [84].
Распространение инфекции может происходить как горизонтальным, так и вертикальным путем. Основным источником инфекции служат больные и переболевшие цыплята и куры, которые выделяют вирус во внешнюю среду или остаются носителями до 49-105 дней после переболевания. Степень устойчивости и восприимчивости кур к вирусу инфекционного бронхита зависит от возраста птицы, пола, иммунного статуса, питания, окружающей среды и др. [69, 111]. Показано, что наиболее выраженный синергизм обнаруживается при совместном протекании ИБК и сопутствующих инфекций таких, как микоплазмоз, болезнь Ньюкасла, инфекционный ларинготрахеит кур, инфекционный колибактериоз [43].
Иммунитет и специфическая профилактика При псреболевании ИБК и иммунизации развивается общий и тканевый иммунитет с соответствующим клеточным и гуморальным ответом. У птиц обнаруживается хороший гуморальный ответ на вирус ИБК, который можно оценить в ИФА, в реакции торможения гемагглютинации [115] уже на 4 день после заражения или в реакции нейтрализации вируса.
Вирусспецифические антитела осуществляют защиту эпителия трахеи после заражения, и, вероятно, предотвращают распространение вируса из