Разработка генодиагностики комплекса аномалий позвоночника [CVM] и иммунодефицита [BLAD] у животных черно-пестрого голштинизированного скота

• Автор: Марзанова, Саида Нурбиевна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристика 4-х генеалогических корней молочного скота: черно-пестрого, палево-пестрого, бурого и красного

1.2. Морфогенетические особенности черно-пестрой породы

1.3. Генетический груз мутаций в породах крупного рогатого скота

1.4. Краткая история описания комплекса аномалий позвоночника (CVM - Complex Vertebral Malformation)

1.5. Этиология комплекса аномалий позвоночника

1.6. Клинические признаки при комплексе аномалий позвоночника

1.7. Встречаемость CVM у черно-пестрого генеалогического корня

1.8. Исторические аспекты по изучению дефицита лейкоцитарной адгезии (BLAD) у крупного рогатого скота
1.9. Этиология дефицита лейкоцитарной адгезии у крупного рогатого скота
1.10. Патогенез и клинические признаки дефицита
лейкоцитарной адгезии у крупного рогатого скота
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. История становления исследований молекулярно-генетических болезней: дефицита лейкоцитарной адгезии (BLAD) и комплекса аномалий позвоночника (СУМ) у крупного рогатого скота в Российской Федерации
3.2. Отбор образцов для исследований
3.3. Оборудование для проведения ПЦР-анализа
3.4. Комплекты реагентов для выделения ДНК из различных биологических материалов
3.5. Методы выделения ДНК из различных биологических материалов
3.5.1. Фенольно-хлороформовый метод выделения ДНК
3.5.2. Сорбентный метод выделения ДНК
3.5.3. Перхлоратный метод выделения ДНК
3.5.4. Метод солевой экстракции ДНК из крови
3.5.5. Метод Кавасаки по выделению ДНК из крови
3.5.6. Сравнительный анализ методов выделения ДНК из различных материалов
3.5.7. Определение концентрации ДНК, выделенной из исследуемых образцов
3.6. Характеристика качества пробирок Эппендорфа

3.7. ПЦР-анализ для диагностики мутантных ВЬ и СУ аллелей
с использованием различных типов праймеров
3.8. Диагностика миссенс-мутаций СУ и ВЬ у крупного рогатого
скота методом ПЦР-РВ
3.9. Генетическая генеалогия у быков-производителей, носителей
СУ и ВЬ аллелей
3.10. Поток генов и характеристика популяций голштинизирован-ного скота в Российской Федерации по СУМ и ВЕАБ
3.11. Геногеография ВЬ и СУ в Российской Федерации и за рубежом
4. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ
НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
9. ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. В настоящее время у крупного рогатого скота описано около 60 наследственных заболеваний, которые выявляются на уровне ДНК [136]. Они вызывают морфологические и функциональные аномалии, негативно влияют на здоровье и продуктивность животного. Точность диагностики комплекса аномалий позвоночника [CVM] и дефицита лейкоцитарной адгезии [BLAD] значительно повысилась благодаря установлению генетической природы данных молекулярных болезней [145; 217; 92; 41; 74; 71; 110; 184; 43; 198; 30]. В развитых странах Европы и Северной Америки созданы специальные программы по элиминации мутантных CV и BL аллелей в популяциях черно-пестрой породы [208; 209; 103; 2007; 210]. В России выдающихся производителей и ремонтный молодняк также проверяют на носительство мутантных аллелей, а результаты регулярно публикут ют в каталогах по племенным быкам [66; 54; 59; 31].
Для формирования здорового племенного и высокопродуктивного поголовья животных важной задачей ветеринарных врачей и специалистов по племенному делу является своевременная диагностика и искоренение источника, вызывающего генетически обусловленных заболеваний. Знание молекулярной структуры, определение гетерозиготного носителя и мутанта, является основой для эффективной борьбы с наследственным заболеванием в связи, с чем данная работа имеет важное научное и практическое значение.
Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась разработка комплексной диагностики CV и BL мутаций у крупного рогатого скота чёрно-пестрого генеалогического корня и генетическая оценка родословных быков-производителей-носителей по данным аллелям.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

и консервантов. В качестве консерванта для взятия крови использовали следующий состав:
1. Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 50 г
Хлористый натрий - 10 табл.
(0,9 г в 1 таблетке)
Вскипятить маточный раствор, затем остудить до 80°С и добавить Глюкозу - 10 г
После раствор охлаждаем до 37°С, добавляем Стрептомицин 1 г (2 фл.)
Доводим раствор до 1 л дистиллированной водой.
Данный консервант лучше хранить в замороженном виде в морозильнике. Консервант использовали в соотношении 1: 4 - 1: 5 с цельной кровью. В качестве антикоагулянта хорошо апробирован раствор 0,5% ЭДТА, он также может быть использован для проведения диагностики мутантных аллелей.
3.3. Оборудование для проведения ПЦР-анализа. Для проведения ПЦР-анализа необходимы специальные помещения и набор оборудования. Используемые приборы могут быть отечественного или зарубежного производства. Минимум оборудования и необходимые помещения, для лаборатории, с целью проведения ПЦР-анализа приведены в табл. 5.
Таблица 5 - Комплектация лаборатории для проведения ПЦР-анализа
В комплектацию лаборатории входит оборудование для следующих зон:
I. Зона приема и регистрации материала
1. Стерильный ламинарный бокс (например, «БАВп-0,1»-«Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные системы», Россия)
2. Лабораторная центрифуга с ротором Я-12/10 с пластиковыми адаптерами на 12 мест для 10 мл пробирок (например, «ЬМС 3000»,