Получение рекомбинантных антигенов вируса ящура О/Тайвань/99, перспективных для разработки противоящурных вакцин, с использованием бактерий и растений

• Автор: Андрианова, Екатерина Павловна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 157 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
ІДЕ ЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Вирус ящура
2. Вакцины против ящура
2Л Традиционная вакцина
2.2 ДНК-вакцины
2.3 Вакцины на основе ослабленных вирусов
2.4 Пустые вирусные капсиды как основа для вакцины
2.5 Субъединичные вакцины
3. Антигенные сайты вируса ящура
4. Гетерологичные системы экспрессии белков
4.1 Бактериальная система экспрессии
4.2 Растительная система экспрессии
4.2.1 Трансгенные растения как система получения белков
4.2.2 Получение белков в хлоропластах
4.2.3 Транзиентная экспрессия белков в растениях
5. Получение в растениях вакцинных белков вируса ящура
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Изучение возможности получения пустых капсидов ящура в растениях
1.1 Экспрессия предшественника капсидных белков Р1-2А в растениях N ЬеШкатіапа
1.2 Коэкспрессия предшественника Р1-2А и протеазы ЗСР'° в N.

benthamiana
1.3 Экспрессия индивидуальных капсидных белков вируса ящура в
растениях N. Benthamiana
2. Получение полиэпитопного белка вируса ящура в бактериях и растениях
2.1 Получение белка CBD-PE в клетках E
2.2 Получение полиэпитопного белка НРЕ в E
2.3 Получение белка НРЕ в растениях N. benthamiana
2.4 Схема получения полиэпитопного белка НРЕ из клеток бактерий
и растений
2.5 Оценка иммуногенности НРЕ белка
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
В настоящей работе применяют следующие определения, обозначения и сокращения:
иОРР - зеленый флуоресцентный белок
НТР - нетранслируемый район мРНК
ХВК - X вирус картофеля
ВТМ - вирус табачной мозаики
НВс - ядерный антиген вируса гепатита В
ВПЧ - вирусоподобная частица
ВТЦ - вирус тристецы цитрусовых
ВЖС - вирус желтухи свеклы
Р1-2А - предшественник капсидных белков Р1 с пептидом 2А
СВО-РЕ - полиэпитопный белок с хитин-связывающим доменом
НРБ - полиэпитопный белок с шестью аминокислотными остатками
гистидинов

4.2.1 Трансгенные растения как система получения белков
Создание трансгенного растения включает в себя непосредственно генетическую трансформацию растительной клетки и дальнейшую регенерацию растения из трансформированной клетки. Впервые способность растения к генетической трансформации была выявлена в 80-х гг. (Bevan et al., 1983). Первый рекомбинантный фармацевтический белок (гормон рос та) и антитела были получены в трансгенных растениях в 1986 и 1989 гг. соответственно (Hiatt et al., 1989; Barta et al., 1986). Ыо только в 1997 году рекомбинантный белок авидин стали получать из трансгенной кукурузы для коммерческих целей (Hood et al., 1997). Это доказало, что растения действительно можно использовать для получения белков в промышленных масштабах.
Одним из первых вакцинных белков, полученных из трансгенных растений, были поверхностные антигены вируса гепатита В из трансгенного табака в 1992 году (Mason et al., 1992). С тех пор многие исследовательские группы изучали возможности получения вакцинных белков различных патогенов и вирусов в растениях. В трансгенных растениях было получено огромное число вакцинных белков различных патогенов в табаке, картофеле, томатах, люцерне и др.: В-субъединица токсина холеры, поверхностный антиген гепатита В (HBsAg), капсидные белки и эпитопы рота- и папиломавирусов, пептиды вируса бешенства, гемагглютинины возбудителя кори и многие другие (Tiwari et al., 2009).
В настоящее время процесс получения трансгенного растения не представляется сложным и является самым распространенным методом получения белков в растениях. На его основе создано множество интересных и практичных систем для получения белков. Например, аккумуляция белков в семенах злаковых, что позволяет хранить эти семена достаточно продолжительное время при комнатной температуре с сохранением свойств