Совершенствование методов специфической профилактики и лабораторной диагностики гриппа лошадей

• Автор: Иванов, Владимир Викторович
• Шифр специальности: 03.01.06, 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 146 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Краткая историческая справка

1.2 Морфология и химический состав вируса гриппа

1.3 Антигенная структура вируса гриппа

1.4 Патогенез гриппозной инфекции

1.5 Эпизоотология гриппа лошадей

1.6 Лабораторная диагностика гриппа лошадей

1.7 Иммунитет и специфическая профилактика

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Материалы, экспериментальные модели и условия экспериментов
2.2 Методы исследований
3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Изучение иммунобиологических свойств эпизоотического 56 штамма А/лошадь 2/Битца/07 ВГЛ
3.1.1 Определение видовой принадлежности штамма ВГЛ «А/лошадь 56 2/Битца/07»
3.1.2 Генотипирование и филогенетический анализ штамма 58 «А/лошадь 2/Битца/07» ВГЛ
3.1.3 Патогенность эпизоотического штамма 64 «А/лошадь 2/Битца/07» ВГЛ
3.1.4 Определение условий для максимального накопления 66 штамма вируса «А/лошадь 2/Битца/07»
3.1.5 Стабильность биологических свойств штамма 67 «А/лошадь 2/Битца/07» ВГЛ при хранении
3.1.6 Иммуногенная активность инактивированных 68 штаммов вируса гриппа лошадей второго подтипа

3.2 Серологический мониторинг вируса гриппа лошадей
3.2.1 Анализ распространённости вируса гриппа лошадей
3.2.2 Циркуляция вируса гриппа лошадей НЗА'8 в популяции собак
3.3 Совершенствование инактивированной 74 поливалентной вакцины против гриппа лошадей
3.3.1 Определение иммуногенной активности усовершенствованной 74 инактивированной поливалентной вакцины против гриппа лошадей
на основе эпизоотического штамма «А/лошадъ 2/Битца/07»
3.3.2 Динамика формирования поствакциналъного 76 иммунитета у лошадей на усовершенствованную вакцину инактивированную поливалентную против гриппа лошадей
3.4 Разработка тест системы ИФА для серологической 79 диагностики гриппа лошадей
3.4.1 Очистка и концентрирование вируса гриппа лошадей
3.4.2 Получение специфической к ВГЛсыворотки крови лошадей
3.4.3 Получение конъюгатов антител с пероксидазой хрена
3.4.4 Отработка оптимальных условий постановки 82 иммуноферментного анализа
3.4.5 Определение позитивного и негативного порогов для 84 разграничения специфической и неспецифической реакции
3.4.6 Сравнительная оценка результатов ИФА и РТГА при 86 диагностике гриппа лошадей
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

Список сокращений
БСА- бычий сывороточный альбумин
вгл- вирус гриппа лошадей
ГАЕ - гемагглютинирующая единица
ГЧЗТ- гиперчувствительность замедленного типа
ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА- иммуноферментный анализ
ИФН- интерферон
МЭБ- Международное Эпизоотическое Бюро
о. е. - оптическая единица
О. П- оптическая плотность
ОРГ- отдельный радиальный гемолиз
ПЦР- полимеразноцепная реакция
РДП- реакция диффузной преципитации
РКЭ- развивающиеся куриные эмбрионы
РН- реакция нейтрализации
РІЖ - рибонуклеиновая кислота
РПНА - реакция подавления нейраминидазной активности
РСК- реакция связывания комплемента
РТГА- реакция торможения гемагглютинации
СПФ- свободные от патогенной флоры
ФСБР - фосфагно - солевой буферный раствор
І8- иммуноглобулины
секреторные иммуноглобулины
лошадей не воспроизводится, считали признаком заболевания лошадей четырёхкратное повышение у них антител после заражения. Авторы пришли к выводу, что титр антигемагглютининов 1:128 у вакцинированных лошадей служит достоверным показателем их устойчивости к инфекции. Высокий уровень антител к гемагглютинину вируса является непродолжительным, поэтому для продления этого периода в состав противогриппозных вакцин вводят адъюванты. Иммунизация лошадей инактивированными вакцинами против гриппа вызывает образование только вируснейтрализующих антител, но не клеточный иммунный ответ.
Okamoto S, Yoshii Н, Akagi Т, (2007) провели исследования по применению в качестве адъюванта гаммаглутаминовой кислоты синтезированной бактериями Bacillus natto. Результаты исследований показали, что подкожное введение смеси антигенов ВГЛ и гаммаглутаминовой кислоты приводит к образованию как специфических антител, так и к включению клеточных механизмов иммунного ответа (выработка интерферона (у), интерлейкинов IL-4, и IL-6 и т.д.), включая деятельность ЦТЛ [135].
Сывороточные антитела блокируют проникновение вируса в клетки, усиливают антителозависимую клеточную цитотоксичность естественных киллеров, нейтрализуют вирус самостоятельно или в присутствии комплемента. Иммуноглобулины класса М - IgM (пентамеры) появляются первыми на ранних стадиях инфекции или иммунизации, но содержание их в сыворотке незначительно [168,170]. Антитела изотипа IgG являются мономерами, эффективно нейтрализуют гомологичный вирус, образуются в более поздние сроки и составляют 70-80 % от всех сывороточных противогриппозных антител. Антитела изотипа IgG обуславливают