Разработка новых биотехнологических методов получения инсулина и лечения инсулинозависимого сахарного диабета мелких домашних животных

• Автор: Абдрахманов, Игорь Камильевич
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 313 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1 ВВЕДЕНИЕ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2Л Классификация СД

2.2 Этиология и патогенез СД

2.3 СД у домашних животных: современные методы лечения

2.4 Инсулин - свойства и функции в организме

2.4.1 Биосинтез инсулина

2.4.2 Способы промышленного получения инсулина

2.5 Развитие современных биотехнологических подходов к лечению

ИЗСД
2.5.1 Стволовые клетки в реконструкции панкреатической функции
2.5.2 Манипуляции с клетками млекопитающих, направленные на
получение клеток с заданными свойствами
2.5.2.1 Генетическая трансформация клеток
2.5.2.2 Методы клеточной инженерии
2.5.2.3 Гибридизация соматических клеток животных. Особенности получения гибридных клеточных культур на основе клеток - продуцентов биологически активных веществ и способы оценки гибридов
2.5.2.4 Суспензионное культивирование клеток - продуцентов биологически
активных веществ
2.5.3 Особенности получения и культивирования Р-клеток - донорского
материала для трансплантации
2.5.3.1 Механизм пролиферации и факторы роста Р-клеток
2.6 Трансплантация Р-клеток при лечении СД1
2.6.1 Биологическая совместимость тканей при трансплантации, НЬА-
типирование
2.6.2 Период «гестационного окна»

2.6.3 Иммунопривилегированные зоны для трансплантации островковых клеток
2.6.4 Трансплантация р-клеток и островков Лангерганса
3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1 Оборудование и реактивы
3.2 Культуры клеток и методы работы с ними
3.3 Гибридизация клеток
3.4 Исследования на гистологическую совместимость
3.5 Методы определения продукции инсулина
3.6 Трансплантация клеток
4 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 Выделение клеточных популяций, представленных р-клетками
поджелудочной железы плодов животных и их очистка
4.1.1 Выделение клеточных популяций, представленных Р-клетками ПЖ
плодов кроликов и их очистка
4.1.2 Выделение клеточной популяции, представленной р-клетками ПЖ
плодов собак и их очистка
4.1.3 Выделение клеточной популяции, представленной Р-клетками ПЖ
плодов кошек и их очистка
4.1.4 Стимуляция Р-клеток из ПЖ плодов кролика, собаки и кошек
глюкозой
4.2 Межвидовая гибридная культура почки овцы по ТК" с Р-клетками
поджелудочной железы плодов кроликов, получение, клонирование и
изучение её свойств и признаков
4.2.1 Проверка на реверсию мутантной по тимидинкиназе культуры почки
овцы
4.2.2 Определение показателя отрицательного контроля для оценки
секреции инсулина гибридными и первичнотрипсинизированными 13-клетками

4.2.3 Гибридизация мутантной культуры ПО ТК'-150 с (3-клетками,
выделенными из ПЖ плодов кролика
4.2.4 Клонирование гибридов ПО ТК- х Ркр
4.2.4.1 Потомки гибридов 3.1.2.А, 3.1.2.Б
4.2.4.2 Клонирование клеточного гибрида Д
4.2.4.3 Клонирование клеточного гибрида Г
4.2.4.4 Реклонирование клона Г
4.2.4.5 Реклонирование клона Г
4.2.4.6 Реклонирование клона ГГ
4.2.5 Стимуляция клеточных гибридов глюкозой
4.2.6 Цитохимическое и иммуноцитохимическое выявление инсулина гибридными клетками
4.2.7 Селекция клонов гибридной культуры ПО ТК' х Ркр с наиболее высокой продукцией инсулина
4.2.8 Культурально-морфологические, кариологические и секреторные свойства гибридного клона ГА-2 культуры клеток ПО ТК- х Ркр
4.2.9 Кариологические свойства клонов гибридной культуры ПО ТК- х Ркр
4.2.10 Получение суспензионных клонов гибридной культуры ПО ТК- х Ркр
4.2.11 Определение гистологической совместимости гибридной культуры in
vitro
4.3 Разработка модели получения инсулин-продуцирующих клеток in vitro с использованием стволовых клеток
4.3.1 Выделение примордиальных половых зародышевых клеток из плодов свиней и их очистка
4.3.2 Культивирование ППЗК свиньи
4.3.3 Направленная in vitro дифференцировка ЭПК свиньи в инсулин -секретирующие клетки

инсулин. Клетки печени и ПЖ в своем развитии очень похожи. На определенном этапе развития зародыша они развиваются из одинаковых стволовых клеток. Исследователи ввели в клетки печени ген, который играет важную роль в формировании клеток ПЖ. Одной из возможностей применения этого открытия является создание вырабатывающих инсулин клеток в лабораторных условиях с последующей пересадкой больным СД [339].
Стволовые клетки, плюрипотентные или предшественники Р-клеток, представляют собой нелимитированный ресурс Р-клеток. В теории, Р-клетки могут быть получены из плюрипотентных стволовых клеток [эмбриональных стволовых клеток (ESC); эмбриональных зародышевых клеток (EGC) или тератокарциномы, эмбриональных клеток карцином (ЕСС)] или от их непосредственных предшественников - панкреатических протоковых клеток (Рис. 1).
Примордиальные гонадные
Инертная клеточная
Плюрипотентные
стволовые клетки
Взрослые ткани:
головной мозг
костный мозг
hi н
мышцы
кожа
/л vitro дифференциация Селекция клеточных линий
Протоковые
клетки
В-клетки !
Трансплантация клеток
Рис. 1. Происхождение 0-клеток из возможных стволовых клеток. ES -эмбриональные стволовые, EG - эмбриональные зародышевые, ЕС - эмбриональная карцинома.
ESC способны дифференцироваться in vitro и in vivo в различные клеточные типы [324, 335] и посредством этого способствовать