Разработка экспериментальной технологии получения антитоксического энтеросорбента для интраинтестинальной нейтрализации экзотоксина холерного вибриона

• Автор: Овчинникова, Мария Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 138 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННЫЕ ЭНТЕРОСОРБЕНТЫ И ИХ МЕСТО В ЛЕЧЕНИИ И ПРОФИЛАКТИКЕ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
1.1 Энтеросорбенты в медицинской практике
1.2 Механизмы действия энтеросорбентов
ГЛАВА 2 БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ СЕЛЕКТИВНЫХ ЭНТЕРОСОРБЦИОННЫХ ПРЕПАРАТОВ
2.1 Методы получения селективных энтеросорбентов
2.2 Матрицы-носители в сорбционных системах
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3 ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1 Объекты исследования
3.1.1 Бактериальный штамм
3.1.2 Бактериальный антиген
3.1.3 Лабораторные животные
3.1.4 Сыворотки и иммуноглобулины
3.1.5 Сорбционные матрицы
3.2 Материалы и методы исследований
3.2.1 Реактивы и растворы
3.2.2 Питательные среды
3.2.3 Приборы и оборудование
3.2.4 Проведение осадительной коацервации
3.2.5 Определение концентрации белка
3.2.6 Определение емкости сорбционной матрицы и степени извлечения
белка
3.2.7 Реакция диффузной преципитации по Оухтерлони
3.2.8 Определение токсиннейтрализующей активности

3.2.8.1 Постановка кожной пробы по Крейгу
3.2.8.2 Постановка теста отека задней конечности
3.2.8.3 Определение токсиннейтрализующей активности в тонком
кишечнике кроликов-сосунков
3.2.9 Дот-иммуноанализ
3.2.10 Определение адсорбционной способности по метиленовому синему
3.2.11 Определение белок-связывающей способности
3.2.12 Определение сыпучести лиофилизированного специфического энтеросорбента
3.2.13 Определение насыпного объема и угла откоса порошка и гранулята специфического энтеросорбента
3.2.14 Определение потери в массе при высушивании
3.2.15 Определение прочности таблеток
3.2.16 Испытания на истираемость таблеток
3.2.17 Определение распадаемости таблеток специфического энтеросорбента
3.2.18 Статистическая обработка результатов исследований
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 4 РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ СХЕМЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОХОЛЕРНОГО АНТИТОКСИЧЕСКОГО ЭНТЕРОСОРБЕНТА
4.1 Получение высокоактивных антитоксических сывороток и иммуноглобулинов
4.1.1 Обоснование выбора адъюванта для получения высокоактивных антитоксических сывороток
4.1.2 Выделение иммуноглобулиновой фракции
4.2 Обоснование выбора и подготовка сорбционных матриц
4.3 Изучение эффективности иммобилизации антитоксических иммуноглобулинов на сорбционных матрицах
4.4 Изучение процесса десорбции иммуноглобулинов с сорбционных
матриц

4.5 Конструирование антитоксического противохолерного энтеросорбента
ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СКОНСТРУИРОВАННОГО АНТИТОКСИЧЕСКОГО ЭНТЕРОСОРБЕНТА
5.1 Изучение токсиннейтрализующей активности специфического энтеросорбента в тестах на лабораторных животных
5.1 Л Исследование токсиннейтрализующей активности специфического энтеросорбента в кожной пробе по Крейгу
5.1.2 Изучение токсиннейтрализующей активности в тесте отека задней конечности
5.1.3 Изучение токсиннейтрализующей активности в тонком кишечнике кроликов-сосунков
5.2 Определение общей адсорбционной способности специфтческого энтеросорбента по фармакологическим маркерам
5.3 Определение специфической активности антитоксического энтеросорбента in vitro в дот-иммуноанализе
5.4 Выявление корреляции результатов дот-иммуноанализа in vitro и теста по
Крейгу in vivo
ГЛАВА 6 РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ВЫПУСКА СПЕЦИФИЧЕСКОГО ЭНТЕРОСОРБЕНТА
6.1 Лиофилизация специфического энтеросорбента и изучение технологических характеристик порошка-лиофилизата
6.2 Гранулирование специфического энтеросорбента
6.3 Таблетирование специфического энтеросорбента
6.4 Изучение лечебно-профилактической эффективности специфического энтсросорбента при внутрикишечном заражении биомоделей вирулентным
штаммом Vibrio cholerae
ГЛАВА 7 ИССЛЕДОВАНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО
СПЕЦИФИЧЕСКОГО ЭНТЕРОСОРБЕНТА
7.1 Изучение стабильности антитоксического энтеросорбента в условиях, моделирующих желудочно-кишечный тракт

Несмотря на большой потенциал хитозана как материала для биомедицинского применения, к настоящему времени он активно позиционируется как пищевая добавка с иммуностимулирующими свойствами. Использование хитозана и частиц на его основе для направленной специфической энтеросорбции является весьма перспективным направлением в биотехнологии, открывающим возможность конструирования новых лечебно-профилактических препаратов.
Таким образом, направление биотехнологии по получению модифицированных энтеросорбентов с заданными и/или прогнозируемыми свойствами является актуальным и перспективным [11, 32, 186], и для этих целей могут быть использованы разнообразные матрицы в сочетании с активными специфическими модифицирующими агентами.
Исходя из анализа данных литературы, делаем вывод, что в настоящее время не существует технологии изготовления селективных (специфических) энтеро-сорбционных препаратов для эффективной внутрикишечной нейтрализации экзотоксина холерного вибриона для лечения и/или экстренной иммунопрофилактики холеры. Использование специфических антитоксических иммуноглобулинов в сочетании с обоснованным выбором сорбционной матрицы создает предпосылку для разработки биотехнологии изготовления нового лечебно-профилактического противохолерного препарата, чему и посвящено данное научное исследование.