Комплексы антител с нанодисперсными носителями : синтез, свойства и применение в иммунохроматографии

• Автор: Таранова, Надежда Алексеевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 206 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Иммунохимические тест-методы

1Л.1 Агглютинационный иммуноанализ

1.1.2 Тест-системы, основанные на принципе иммуноферментного анализа

1.1.3 Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ

1.1.4 Методы иммуноанализа на основе резонансного переноса энергии

1.1.5 Иммунофильтрация

1.1.6 Иммуноаффинные колонки

1.1.7 Микрофлюидные тест-системы
1.1.8 Иммунохроматография
1.2. Маркеры для тест-систем: сравнительная характеристика
1.3 Мультиплексная детекция и иммунохимические тест-методы
1.4. Кинетика иммунохимических взаимодействий в тест-системах и ее
математические описания
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы и оборудование
2.2 Методы
2.2.1 Синтез конъюгата хлорамфеникол-соевый ингибитор трипсина
2.2.2 Определение титров антител против антибиотиков методом твердофазного иммуноферментного анализа
2.2.3 Определение антибиотиков методом конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа
2.2.4 Синтез, выделение и характеристика конъюгатов квантовых точек с антителами
2.2.5 Получение наночастиц коллоидного золота
2.2.6 Получение флоккуляционной кривой для взаимодействия коллоидного золота с антителами
2.2.7 Синтез конъюгата антител с коллоидным золотом

2.2.8 Определение относительного квантового выхода свободных квантовых точек и их конъюгатов
2.2.9 Определение гидродинамических радиусов наночастиц и их конъюгатов с антителами
2.2.10 Характеристика размеров наночастиц и их конъюгатов методом просвечивающей электронной микроскопии
2.2.11 Изготовление иммунохроматографических тест-систем
2.2.12 Проведение иммунохроматографического анализа
2.2.13 Определение аналитических характеристик тест-систем
2.2.14 Измерение констант иммунохимических реакций антител против хлорамфеникола и их конъюгата с квантовыми точками с использованием прибора Віасоге X
2.2.15 Расчет констант взаимодействия антитело-антиген, полученных с использованием прибора Віасоге X
2.2.16 Определение титров антител против иммуноглобулина Е методом
твердофазного иммуноферментного анализа
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Синтез конъюгатов антител с нанодисперсными маркерами
3.1.1 Синтез конъюгата квантовых точек с антителами
3.1.2 Синтез конъюгата коллоидного золота с антителами
3.2 Сравнительная характеристика нанодисперсных маркеров и их конъюгатов
3.2.1 Характеристика размеров наночастиц и их конъюгатов
3.2.2 Характеристика оптических свойств квантовых точек и их конъюгатов
3.2.3 Пределы детекции маркеров
3.2.4 Оценка антигенсвязывающей способности конъюгатов квантовых точек
3.2.5 Характеристика состава конъюгатов антител с нанодисперсными маркерами.
3.3 Разработка иммунохроматографических тест-систем на основе квантовых точек
3.3.1 Разработка и апробация иммунохроматографической тест-системы на основе квантовых точек для определения хлорамфеникола в молоке
3.3.2 Разработка и апробация иммунохроматографической тест-системы на основе КвТ для определения иммуноглобулина Е

3.4 Разработка мультиплексных иммунохроматографических тест-систем..
3.4.1 Мультиплексная иммунохроматографическая тест-система с использованием квантовых точек
3.4.2 Мультиплексная иммунохроматографическая тест-система на основе
двумерного массива зон связывания
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

кристаллической решеткой [145]. Роль акцептора в большинстве случаев играют комплексы трехвалентных лантанидов - самарий, иттербий и др. [146]. Благодаря эмиссии в ближней инфракрасной области тест-системы на основе лантанидных комплексов характеризуются низким фоновым сигналом, что позволяет с их помощью тестировать различные сложные матриксы, такие как кровь, слюна, экстракты пищевых продуктов [146-148].
К недостаткам преобразующих флуорофоров следует отнести низкий квантовый выход (0,01-0,1) [149] и склонность к агрегации [150]. На основе UCP реализованы иммунохроматографические тест системы для определения ряда бактериальных патогенов -Escherichia coli, Streptococcus pneumonia, Brucella sp. и др. [151; 152].
Инфракрасные маркеры
В качестве инфракрасных маркеров в тест-системах используются композитные материалы Y2Ch:Nd3+ или YF3: Ег3+. При облучении светом в видимом диапазоне (500-900 нм) эти соединения флуоресцируют в ближней инфракрасной области спектра (900-1100 нм) [153; 154].
Как и для преобразующих флуорофоров, для данных соединений характерно высокое соотношение сигнал : шум, обеспечиваемое благодаря низкому собственному свечению носителя [147]. Главный недостаток инфракрасных маркеров на основе лантанидов - нестабильность из-за тушения флуоресценции, которое можно снизить введением меток в латексные, полимерные или кремниевые наночастицы [155].
Квантовые точки
Полупроводниковые квантовые точки (КвТ) представляют собой нанокристаллы бинарных соединений из элементов II—VI и III—V групп Периодической системы Менделеева, линейные размеры которых по всем трем направлениям меньше радиуса экситона Бора данного соединения (1-10 нм) [156-158]. Например, для CdSe радиус экситона Бора составляет 6 нм, и размер КвТ, соответственно, варьирует от 1 до 6 нм. Малые размеры полупроводниковых нанокристаллов приводят к тому, что образующаяся при облучении пара электрон - дырка (экситон) перемещается внутри кристалла и испускает фотон: частица флуоресцирует. Квантовые точки
характеризуются высокой внутренней энергией носителей заряда, а также