Влияние куркумина и глиотоксина на звездчатые клетки печени и портальные фибробласты крыс in vitro

• Автор: Миянович, Оля
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Клетки печени, их превращение, основные фиброгенные популяции

1.1.1 Морфология печени

1.1.2 Эмбриональное развитие печени

1.1.3 Клетки печени

1.1.4 Цитокиновая регуляция в печени

1.1.5 Митогены в печени

1.1.6 Фиброз и цирроз печени

1.1.7 Миофибробласты

1.1.8 Звёздчатые клетки печени
1.1.9 Портальные фибробласты
1.1.10 Клеточные маркеры Thy-1, а-ГМА
1.2 Экзогенные и эдогенные биологически активная вещества, оказывающие влияние на биохимические и молекулярно-биологические процессы развития и дифференцнровки клеток печени
1.2.1 Транскрипционная регуляция активации звездчатых клеток печени
1.2.2 Куркумин
1.2.3 Глиотоксин
1.2.4 Инсулин
1.2.5 TNF-a
1.3 Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Получение эксплантационной культуры из эксплантов печени крыс Rattus norvégiens
2.2 Получение эксплантационной культуры из крупных портальных трактов

2.2.1 Получение портальных фибробластов из крупного портального тракта крыс Rattus norvégiens методом эксплантации после проназно-колагеназной обработки
2.3 Получение фибробластов (ФБ) кожи крыс Rattus norvegicus
2.4 Получение клеток костного мозга (МСК) крыс Rattus norvegicus
2.5 Метод иммуноцитохимического окрашивания
2.5.1 Пероксидазно-антипероксидазный метод
2.5.2 Иммунофлуоресцентный метод
2.6 Иммуногистология
2.7 Проточная цитофлуориметрия
2.7.1 Исследование апоптоза методом окрашивания Annexin-V FITC (fluorescein isothiocyanate) и PI
2.8 Иммуноблотинг
2.9 Трансфекция клеток с помощью трансфекционного агента TurboFect.
2.10 Исследование клеточного индекса с помощью прибора xCELLigance Real-Time Cell Analayzer
2.11 MTS-тест
2.12 Диференцировка
2.12.1 Анализ дифференцировки
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Фенотипический анализ клеток, полученных методом эксплантации из фрагментов печени и крупных портальных трактов новорожденных крыс Rattus norvegicus
3.1.1 Дифференцировочный потенциал (фенотипическая пластичность) клеток, получаемых методом эксплантации из фрагментов печени и крупных портальных трактов новорожденных крыс
3.2 Влияние химических веществ (куркумин, глиотоксин, инсулин и TNF-a) на ПФ, полученных из крупных портальных трактов
3.2.1 Влияние куркумина на культуру клеток ПФ, полученных из крупных портальных трактов
3.2.2 Влияние глиотоксина на культуры клеток ПФ, полученные из крупных портальных трактов

3.2.3 Влияние инсулина на культуры клеток, полученные из крупных портальных трактов
3.2.4 Влияние TNF-a на культуры клеток ПФ, полученные из крупных портальных трактов
3.3 Влияние исследуемых веществ на активность митохондриальных дегидрогеназ (пролиферативный MTS тест)
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

гептадиен-3,5-дион, его молекулярный вес составляет 368 кДа выделяемый из различных сортов куркумы, травянистого растения семейства Имбирные (Shu, et al., 2009). Он является одним из наиболее изученных веществ натурального происхождения (Kang, et al., 2009). Впервые в чистом виде он был выделен в 1815 году (Goel, et al., 2008). В основном куркумин используется в качестве приправы. Так же он веками используется в традиционной медицине. Так, в древнем Китае куркумин использовали в качестве противовоспалительного препарата при заболеваниях кожи и кишечника. Кроме этого в традиционной медицине он находит применение при лечении самых разных заболеваний, включая сахарный диабет 2 типа, астму, аллергию, ревматоидный артрит, сердечно-сосудистые заболевания, атеросклероз, нейродегенеративные болезни (болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз), катаракту, раковые заболевания и заболевания легких (Chih-Li Lin, 2008; Henrotin, et al., 2010; O'Connell, et al., 2008; Wang, et al., 2007). Куркумин обладает местным антибактериальным, противовирусным, противогрибковым, антипролиферативным, антиоксидантным,
противовоспалительным, ангиогениым и противоопухолевым эффектами (Priya, et al., 2008; Zheng, et al., 2006). Именно поэтому в последние десятилетия возросло значение куркумина для фармакологии. В ходе проведения первой фазы клинических исследований была показана хорошая переносимость куркумина при его приеме внутрь в дозе 3600-8000 мг/сут в течение 4 месяцев. Так же имеется несколько клинических исследований (фаза I), в которых был показан некоторый положительный эффект куркумина у людей с онкологическими и воспалительными заболеваниями (O’Connell, et al., 2008). До сих пор не определены эффективные концентрации куркумина in vivo, т.к он нестабилен in vivo, однако его производные в организме могут действовать как активные формы. Поэтому остаются недостаточно ясными процессы его абсорбции, метаболизма, фармакокинетики, фармакодинамики, распределения и биодоступности в целевом органе и организме в целом (Goel, et al., 2008).