Исследование кинетических параметров надмолекулярного кластера алкоголь- и лактатдегидрогеназы в печени крыс

• Автор: Уланова, Александра Александровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 202 с. : ил.

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Метаболические нарушения при токсическом гепатите

1.1.1. Общая характеристика токсических повреждений печени

1.1.2. Токсический гепатит

1.1.3. Токсические эффекты тетрахлорметана 1.2. Алкогольдегидрогепаза: характеристика, свойства,
роль в защитных механизмах организма 1.3. Лактатдегидрогеназа: характеристика, свойства,

роль в защитных механизмах организма

1.4. Надмолекулярные комплексы ферментов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Постановка эксперимента 2.2. Выделение митохондриальной и цитоплазматической фракций
печени 2.3. Влияние 0,15 М NaCl на активность лактатдегидрогеназы
и алкогольдегидрогеназы в митохондриях печени
2.4. Определение активности лактатдегидрогеназы
2.5. Определение активности алкогольдегидрогеназы
2.6. Определение кинетических характеристик ферментов
2.7. Определение активности каталазы
2.8. Определение МДА
2.9. Морфологическое исследование печени
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1. Активность и кинетические характеристики очищенных
препаратов АДГ и ЛДГ (0,1 mg/ml) и их кластеров (0,1 mg/ml)
3.2. Активность и кинетические параметры АДГ, ЛДГ и их кластеров в
гомогенате печени крыс в норме и при токсическом гепатите
3.2.1. Биохимические и морфометрические показатели крови и печени крыс
при токсическом гепатите
3.2.2. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в прямой реакции и
кластера АДГпр-ЛДГпр 3.2.3. Активность и кинетические показатели АДГобр, ЛДГобр
и кластера ЛДГобр-АДГобр 3.3. Активность и кинетические параметры АДГ, ЛДГ

и их кластеров в цитоплазматической фракции печени крыс в норме и при токсическом гепатите
3.3.1. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в прямой реакции и кластера АДГпр-ЛДГпр
3.3.2. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в обратной реакции и кластера ЛДГобр-АДГобр

3.4. Активность и кинетические параметры АДГ, ЛДГ и их кластеров в митохондриальной фракции печени крыс в норме и при токсическом гепатите
3.4.1. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в прямой реакции и кластера АДГ пр-ЛДГ пр
3.4.2. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в обратной реакции и кластера ЛДГ обр-АДГ обр
3.5. Влияние 0,15М ИаС1 на активность и кинетические параметры АДГ, ЛДГ и их кластеров в митохондриях печени
3.5.1. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в прямой реакции и кластера АДГ пр-ЛДГ пр до солюбилизации
3.5.2. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в обратной реакции и кластера ЛДГ обр-АДГ обр до солюбилизации
3.5.3. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в прямой реакции и кластера АДГ пр-ЛДГ пр в солюбилизате митохондрий печени крыс
3.5.4. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в обратной реакции и кластера ЛДГобр-АДГобр в солюбилизате митохондрий печени крыс
3.5.5. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в прямой реакции и кластера АДГ пр-ЛДГ пр после солюбилизации
3.5.6. Активность и кинетические показатели АДГ, ЛДГ в обратной реакции и кластера ЛДГ обр-АДГ обр после солюбилизации
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АДГ - алкогольдегидрогеназа
AJ1T - аланинаминотрансфераза
АОТ - аэрозоль диизооктилсульфосукцинат натрия
ACT - аспартатаминотрансфераза
АТФ - аденозинтрифосфат
АФК — активные формы кислорода
ГАФД - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа
ЛДГ - лактатдегидрогеназа
НАДН - никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма
НАД - никотинамидадениндинуклеотид
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат
ПАВ - поверхностно - активные вещества
ПОЛ - перекисное оксление липидов
ПЭГ - полиэтиленгликоль
РБФК/О - рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилаза
РФИ - рибозофосфатизомераза
СЖК - свободные жирные кислоты
ТХМ - тетрахлорметан
ФДГ - формиатдегидрогеназа
ФРК - фосфорибулокиназа
цГМФ - циклический гуанозинмонофосфат
МДА - малоновый диальдегид

Как правило, в образовании того или иного комплекса молекул -партнёров принимают участие различные виды связей. Однако, считают, что специфичность комплексообразования обусловлена короткодействующими вандерваальсовыми силами (Березин и др., 1987).
В живой клетке существуют два главных компартмента, где располагаются «растворимые» ферменты: цитоплазма и митохондриальный матрикс. В обоих компартментах концентрация ферментов довольно высока.
Одним из интереснейших свойств цитоплазмы является способность связывать все компоненты клетки. Обеспечивается данное свойство наличием белковых нитей, которые выполняют функцию скелета клетки. Тем самым уже благодаря наличию микротрубочек возможно перемещение компонентов цитоплазмы и их взаимодействие.
Цитоплазма клетки содержит высокие концентрации высокомолекулярных компонентов, занимающих значительную часть объема среды (условия краудинга). Существуют литературные данные, свидетельствующие в пользу того, что краудинг влияет на биохимические процессы, протекающие в клетке (конформационные переходы биомакромолекул, сборка надмолекулярных структур, фолдинг белков, агрегация белков и т.д.).
Тип краудинга, называемый макромолекулярпым ограничением (macromolecular confinement), относится к ситуации, когда макромолекулы оказываются включенными в небольшие клеточные компартменты, или поры, сопоставимые по размерам с макромолекулами. Такие компартменты создаются, в частности, в структурах цитоскелета или в центральной полости шаперонинов типа GroEL (Чеботарева и др., 2004).
В настоящее время достигнуто разрешение 5-8 нм, что достаточно для распознавания комплексов с размерами 20-50 нм и их изучения в условиях краудинга в различных клеточных компартментах (Grünewald et al, 2003). Высокая плотность нитей актина (часть клеточного цитоскелета) и рибосом подкрепляет точку зрения, что цитоплазма скорее заполнена крупными