Целлюлолитические ферментные препараты на основе грибов Trichoderma, Penicillium и Myceliophtora с увеличенной гидролитической активностью

• Автор: Чекушина, Анна Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Г лава 1. Целлюлозосодержащее сырье

1.1. Запасы и характеристика целлюлозосодержащего сырья

1.2. Клеточная стенка растений

1.3. Предварительная обработка целлюлозосодержащего сырья

Глава 2. Ферментативная конверсия целлюлозосодержащего сырья

2.1. Гликозил гидролазы, классификация и механизм действия

2.2. Общие представления о биоконверсии целлюлозосодержащего сырья

2.3. Целлюлазы
2.4. Гемицеллюлазы
2.5. Механизм действия полисахаридмонооксигеназ
2.6. Факторы, влияющие на ферментативную конверсию целлюлозосодержащего

сырья
Глава 3. Различные продуценты ферментов, используемых в процессах

биоконверсии целлюлозосодержащего сырья 3.1 Ферментные комплексы, продуцируемые грибами родов Trichoderma,

Aspergillus, Myceliophthora
3.2. Ферментные комплексы, продуцируемые грибами рода Pénicillium
Глава 4. Масштабирование процессов биоконверсии целлюлозосодержащего сырья
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 5. Материалы и методы экспериментов
5.1. Ферментные препараты
5.2. Субстраты
5.3. Прочие реактивы

5.4. Хроматографические сорбенты
5.5. Определение концентрации белка
5.6. Определение биохимических характеристик ферментов, ферментных

препаратов
5.7. Методы определения активности ферментных препаратов
5.8. Масс-спектрометрический анализ трипсиновых гидролизатов белков
5.9. Метод определения компонентного состава ферментных препаратов
5.10. Гидролиз целлюлозосодержащего сырья
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Г лава 6. Состав и свойства промышленных ферментных препаратов, полученных с помощью различных продуцентов
6.1. Состав и свойства ферментных препаратов, полученных с помощью грибов рода Trichoderma reesei
6.1.1. Состав и свойства ферментных препаратов серии Cellic СТес фирмы Novozymes, созданных для биоконверсии целлюлозосодержащего сырья
6.1.2. Состав и свойства ферментных препаратов серии Accellerase фирмы DuPont&Genencor, созданных для биоконверсии целлюлозосодержащего сырья
6.2. Состав и свойства ферментных препаратов, полученных с помощью грибов рода Myceliophtora thermophila
Г лава 7. Сравнение свойств лучших промышленных ферментных препаратов с лабораторным мультиферментным препаратом, полученным с помощью гриба
Pénicillium verruculosum
7.1. Сравнение гидролитической способности ферментных препаратов при

различных pH и температуре
7.2. Сравнение активности и компонентного состава ферментных препаратов

Pénicillium verruculosum В221-151 и Cellic СТесЗ
Глава 8. Получение и свойства ферментных препаратов Pénicillium verruculosum с
увеличенной гидролитической способностью

8.1. Сравнение свойств полисахаридмонооксигеназ грибов рода Trichoderma reesei, Myceliophtora thermophila и Thelavia terrestris
8.2. Состав и свойства нового ферментного препарата, полученного с помощью гриба рода Pénicillium verruculosum
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЕ
нитратредуктазы. Этот штамм можно использовать в качестве основы для получения продуцентов рекомбинантных гомологичных и гетерологичных белков, что позволяет
формировать состав комплекса секретируемых ферментов. При этом, данный штамм
остается мощным продуцентом целлюлолитических ферментов, поскольку качественный и количественный состав ферментных комплексов штаммов Р,уеггиси1о$ит В1 таБ(-) и В221-151 одинаков [146].
Р.геггнси/оюпп ГГ I
(дикий штамм)
I нг 2.1.2.
| УФ. нг

В1 1ППРГ >
Рисунок 11. Схема получения мутантов и штаммов-реципиентов Р.уегтсиЬэьит В1 шаОЧ Обозначения: УФ - ультрафиолетовое облучение,
НГ - 1-метил-3-нитро-1-нитрозогуанидин.
Отметим, что создание штаммов с устойчивой способностью к сверхсинтезу необходимых ферментов является весьма непростой задачей, так как многоие мутантные штаммы со временем теряют такую способность. Однако, штамм Р.уеггисиЬзит В221-151 обладает стабильной продуктивностью и секрецией гидролитических ферментов, что было неоднократно доказано при пересевах штаммов на селективные среды [145].
Следует отметить что, в ходе систематических исследований, проводимых в нашей лаборатории, штамм Р.меггисиШит В1 таБ*'1 неоднократно использовался в качестве реципиентного штамма при получении комплексных ферментных препаратов разнообразного состава для гидролиза ЦСС [146, 147, 148].