Биохимические и молекулярно-генетические исследования парвовируса В19 при оценке безопасности препаратов альбумина и иммуноглобулина

• Автор: Филатова, Екатерина Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 История открытия парвовируса В

1.2 Таксономическая классификация, структура и организация генома

парвовируса В

1.2.1 Таксономия представителей семейства Рагуоушёае

1.2.2 Структура вириона и организация генома

1.2.3 Генетическая вариабельность парвовируса В

1.3 Патогенез

1.3.1 Жизненный цикл и тропизм вируса
1.3.2 Культивирование парвовируса В
1.3.3 Цитопатология
1.3.4 Патогенез и иммунный ответ
1.4 Клинические аспекты парвовирусной инфекции
1.4.1 Проявления инфекции у здоровых лиц
1.4.2 Парвовирусная инфекция у лиц с иммуннодефицитными состояниями и гематологическими заболеванями
1.5 Диагностика парвовирусной инфекции
1.6 Эпидемиология и трансмиссия
1.7 Парвовирус В19 и безопасность препаратов крови
1.7.1 Распространенность парвовируса В19 среди доноров
1.7.2 Контаминация пулов плазмы и препаратов крови парвовирусом В19
1.7.3 Основные способы получения лечебных препаратов из плазмы крови

1.7.4 Основные производственные методы инактивации/элиминации патогенов и их эффективность в отношении парвовируса В
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Исследуемый материал
2.2 Подготовка образцов для исследования
2.3 Выделение ДНК парвовируса В
2.4 Выявление и количественное определение ДНК парвовируса В
2.5 Получение фрагментов ДНК парвовируса В19 для секвенирования
2.6 Секвенирование фрагментов ДНК парвовируса В
2.7 Выведение аминокислотных последовательностей
2.8 Филогенетический анализ
2.9 Выявление и определение количественного содержания антител к парвовирусу В
2.10 Модельное фракционирование контаминированных пулов плазмы
2.11 Определение фактора вирусной редукции
2.12 Статистическая обработка результатов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Выявление генетических и серологических маркеров парвовируса В19 в крови доноров
3.2 Определение генотипа и филогенетический анализ российских штаммов парвовируса В
3.3 Оценка частоты контаминации парвовирусом В19 производственных пулов плазмы для фракционирования
3.4 Исследование динамики изменения концентрации ДНК парвовируса В19 и оценка уровня вирусной редукции по стадиям технологического процесса
3.5 Исследование препаратов альбумина и иммуноглобулина на содержание генетических и серологических маркеров парвовируса В19
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Было установлено, что при введении плазмы, подвергнутой сольвент-детергентной обработке (SD-плазма) и полученной из пула с исходной концентрацией ДНК B19V 107'5-108'5 копий/мл, у 18 из 19 серонегативных реципиентов наблюдалась сероконверсия, а у 14 также детектировалась вирусная ДНК, что подтверждает трансмиссию B19V. В то же время при использовании плазмы, содержащей ДНК B19V в концентрации 10°’5-103’5 копий/мл, развития антительного ответа и репликации генома B19V не было зафиксировано [53, 150].
На основании этих результатов Управление по надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) регламентировало содержание ДНК B19V в производственных пулах плазмы, которое не должно быть более 104 копий/мл (или МЕ/мл) [218]. Аналогичные критерии были приняты и в Европе [77]. Согласно Европейской Фармакопее пулы плазмы для производства анти-D-иммуноглобулина не должны содержать ДНК B19V в концентрации, превышающей уровень инфекционности [217].
Для того чтобы не допустить попадания донаций с высоким титром вирусной ДНК в производственный пул, большинство зарубежных производителей препаратов крови начали добровольное тестирование плазмы на ДНК B19V. Были разработаны нормативные регулирующие документы, регламентирующие процедуру скрининга крови доноров [219]. Стратегии для исследования минипулов плазмы на ДНК B19V были описаны Igel Н. и Flan В. [216].
Igel Н. сообщил о тестировании минипулов из 512 образцов. Отсекающим значением являлась концентрация ДНК В19V 104 копий/мл, и все минипулы с большим содержанием не допускались в производство. Количество минипулов за один год с концентрацией вирусного генома более 104 копий/мл составило около 4%. До введения скрининга 11% производственных пулов содержали ДНК B19V выше уровня инфекционности. Применение описанного подхода для тестирования донорской плазмы позволили существенно снизить уровень