Изучение активности апоптоза при воздействии некоторых алиментарных и токсических факторов

• Автор: Селяскин, Кирилл Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : ил.

Содержание
Содержание
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Молекулярные механизмы апоптоза и его биологическая роль в поддержании тканевого гомеостаза
1.2. Влияние токсических и алиментарных факторов на систему программируемой гибели клетки
1.3. Современные методические подходы к исследованию активности апоптоза
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Схемы экспериментов
2.3. Биохимический метод определения активности каспазы-
2.4. Морфометрические исследования
2.5. Гель-электрофореза изолированных клеток «ДНК-комет»
2.6. Статистическая обработка результатов исследований
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
3.1. Сравнительная характеристика методов определения активности апоптоза у крыс на экспериментальных моделях токсического воздействия
3.1.1. Определение активности апоптоза в органах крыс на модели токсического воздействия адренокортикотропного гормона
3.1.2. Определение активности апоптоза в органах крыс на
модели токсического воздействия ССЦ
3.2. Оценка чувствительности различных методов определения активности апоптоза при внутрибрюшинном введении низких и минимально действующих доз ССЦ лабораторным животным
3.3. Оценка чувствительности различных органов лабораторных животных к действию низких и минимально действующих доз ССЦ..

3.4. Определение активности апоптоза у крыс как биомаркер при оценке
влияния алиментарных факторов
3.4.1. Влияние дефицита пантотеновой кислоты на активность апоптоза в органах крыс на модели сочетанного действия ССЦ и витаминной недостаточности
3.4.2. Влияние фитостероидов на активность апоптоза у крыс
3.4.3. Определение активности апоптоза у крыс, получавших с рационом ГМ кукурузу, содержащую кассету экспрессии гена np3Aa
Глава 4. Заключение
Выводы
Список литературы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Прогрессивные исследования механизмов апоптоза создали предпосылки для использования теоретических и практических знаний в экспериментальной и клинической медицине [28, 31, 32, 36, 39, 64, 113]. Показано, что после индукции апоптоза дальнейшая судьба клетки (гибель или выживание) зависит от целого ряда факторов, модулирующих программированную клеточную гибель. К таким факторам можно отнести постоянно существующие в клетке белки, такие как семейство Вс 1-2, IAP и каспазы, а также индуцируемые стрессом молекулы -факторы риуляции транскрипции NF-kB и р53, церамид, киназы JNK, р38 и ERK. Нарушение механизмов регуляции апоптоза, приводящее к его ингибированию или неадекватному активированию, лежит в основе патогенеза онкологических, аутоиммунных и нейродегенеративных заболеваний [20, 27, 28, 72, 124].
Исследование молекулярных механизмов, отвечающих за контроль процессов апоптоза, позволило выявить ряд диагностически значимых маркеров различных этапов гибели клетки [44, 49, 113]. Вместе с тем, наличие, как минимум, двух механизмов инициации апоптоза и сложной сети его регуляции позволяет говорить о возможной неоднозначности полученных результатов при изучении молекулярных факторов, характерных для определённого этапа апоптоза, а сравнительная оценка чувствительности различных методов значительно затруднена из-за большого разнообразия оцениваемых критериев. В прикладном аспекте одним из, перспективных направлений, наряду с исследованием молекулярных маркеров апоптоза, может являться непосредственное определение количественных показателей, характеризующих процессы деструкции цитоскелета и фрагментации ДНК в тканях, позволяющих наиболее достоверно оценить активность апоптоза [67, 101, 154].
Поскольку апоптоз является эволюционно-консервативным системным процессом, обеспечивающим поддержание гомеостаза на протяжении всего периода жизни организма, показатели активности апоптоза можно рассматривать как интегральные биомаркеры, отражающие уровень адаптации организма к окружающей среде и обладающие высокой неспецифическон чувствительностью к воздействиям различной природы [51, 61, 134, 138, 152]. Есть все основания

4. Оценка чувствительности различных органов лабораторных животных к действию низких и минимально действующих доз СС
Контроль - - Печень, почки, тимус, мозг, костный мозг, селезенка, семенники, тонкая и толстая кишка Метод «ДНК-комет»
Опыт-1 ССЦ - 0,04 мг/кг массы тела 24 часа
Опыт-2 ССЦ - 0,08 мг/кг массы тела
5. Изучение влияния дефицита пантотеновой кислоты на активность апоптоза в органах крыс на модели сочетанного действия ССЦ и витаминной недостаточности
Контроль - 30 дней Печень, почки, тимус, мозг, костный мозг, селезенка, семенники, тонкая и толстая кишка Метод «ДНК-комет»
Опыт-1 Деф. вит. В
Опыт-2 Деф. вит. В5 + ССЦ -0,08 мг/кг массы тела
6. Влияние фнтостсроидов на изменение активности апоптоза в норме
Контроль - 30 дней Тимус, мозг, сердце Метод «ДНК-комет»
Опыт-1 Фитостероиды 5 мг/кг массы тела
Опыт-2 Фитостероиды 15 мг/кг массы тела
7. Влияние фнтостсроидов на изменение активности апоптоза после стрессорного воздействия электрическим током
Контроль — 30 дней Тимус, мозг, сердце Метод «ДНК-комет»
Опыт-1 Стрессорное воздействие
Опыт-2 Фитостероиды 2 мг/кг массы тела + стрессорное воздействие
8. Определение активности апоптоза у крыс, получавших с рационом ГМ кукурузу, содержащую кассету экспрессии гена чрЗАа
Контроль Традиционный аналог 180 дней Печень, почкц, тимус, мозг, костный мозг, селезенка, семенники, тонкая и толстая кишка Метод «Д1ІК-комет»
Опыт-1 ГМ кукуруза
Эксперимент 1. Определение активности апоптоза в органах крыс на модели токсического воздействия АКТГ. В первой серии исследований на классической модели активации апоптоза под действием АКТГ были отработаны оптимальные методы определения ключевых белков апоптоза - р53, Вах, Вс1-2,