Взаимодействие вирусов растений с антителами: количественные закономерности и практическое применение

• Автор: Сафенкова, Ирина Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 165 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфологи вирусов растений

1.2. Антигенные свойства вирусов и иммунные комплексы вирусов

1.3. Физико-химические модели взаимодействий антиген-антитело

1.4. Способы изучения взаимодействия вирусов с антителами

1.5. Иммуноаналитические системы для детекции вирусов

1.6. Свойства изучаемых иммуноаналитических систем

1.7. Корреляция характеристик иммунохимических взаимодействий и показателей иммуноанатитических систем
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Методы
Глава 3. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ С АНТИТЕЛАМИ
3.1. Характеристика иммунореагентов
3.2. Характеристика взаимодействия вирусов растений с антителами методом цитофлуориметрии
3.3. Характеристика взаимодействия вирусов растений с антителами методом поверхностного плазмонного резонанса на приборе Віасоге X
3.4. Характеристика взаимодействия вирусов растений с антителами методом атомно-силовой микроскопии
3.5. Характеристика взаимодействия вирусов растений с антителами методом иммуноферментного анализа
3.5.1. Количественная характеристика иммунной реакции взаимодействия вирусов растений с антителами в иммуноферментном анализе
3.5.2. Аналитические характеристики иммунофсрментной системы на основе взаимодействия вирусов растений с антителами
Глава 4. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ С АНТИТЕЛАМИ, КОНЪЮГИРОВАННЫМИ С
КОЛЛОИДНЫМ ЗОЛОТОМ
4.1. Получение препаратов антител, конъюгированных с наночастицами коллоидного золота

4.1.1. Получение наночастиц коллоидного золота и их характеристика
4.1.2. Получение конъюгатов наночастиц коллоидного золота с антителами.
4.2. Характеристика взаимодействия вирусов и конъюгатов ианочастиц коллоидного золота с антителами методом поверхностного плазмонного резонанса на приборе Шасоге X
4.3. Характеристика взаимодействия вирусов и конъюгатами ианочастиц коллоидного золота с антителами методами просвечивающей электронной и атомно-силовой микроскопии
4.4. Характеристика взаимодействия вирусов и конъюгатов наночастиц коллоидного золота с антителами методом иммуноферментного анализа.
4.5. Характеристика взаимодействия вирусов и конъюгатов наночастиц коллоидного золота с антителами методом иммунохроматографического анализа
Глава 5. РАЗРАБОТКА ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ
5.1. Оптимизация условий иммунохроматографии
5.2. Определение порогов детекции иммунохроматографических тест-систем
5.3. Апробация тест-систем для анализа растительного материала
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ - антиген
а.о. — аминокислотный остаток
ACM - атомно-силовая микроскопия
AT — антитело
АТ-НКЗ - конъюгат антител с наночастицами коллоидного золота
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВКГ - вирус крапчатости гвоздики
ВТМ — вирус табачной мозаики
ВШС - вирус шарки сливы
ДМСО - диметилсульфоксид
ДРС - динамическое рассеяние света
ЗХВК — золотохлористоводородная кислота
ИФА — иммуноферментный анализ
ИХА — иммунохроматографический анализ
КД — круговой дихроизм
МАт - моноклональные антитела
МЭ - меркаптоэтанол
НКЗ — наночастицы коллоидного золота
o.e. - относительная единица
опт.ед. — оптическая единица
ПАт — поликлональные антитела
ПВП — поливинилпирролидон
ПААГ — полиакриламидный гель
ППР — поверхностный плазмонный резонанс
ПСА - персульфат аммония
ПЭМ — просвечивающая электронная микроскопия
ТЕМЕД — N,N,N ’ ,N ’ -тетраметилэтилендиам и н
ТМБ — 3,3',5,5'-тетраметилбензидин
ФБС — 50 мМ К-фосфатный буфер, pH 7,4, содержащий 0,1 М NaCl
ФБС-Т - ФБС, содержащий 0,05% Тритона X-
ФИТЦ - флуоресцеин изотиоцианат
ЭДТА — динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты
APTES — 3-аминопропилтриэтоксисилан

участках мембраны, визуализуемых как окрашенные полосы. В качестве меток в данных системах используют ферменты, окрашенные латексы, флуоресцентные метки, но в большинстве случаев - коллоидное золото [154]. В зависимости от типа аналита и предъявляемых практических требований используют разные схемы анализа [155-159], на рис. 9 представлены самые распространенные - конкурентный и «сэндвич» форматы иммунохроматографии.
Поскольку вирусы являются поливалентными антигенами, для которых предпочтителен «сэндвич»-формат ИХА (рис. 9-Б, В), рассмотрим его подробнее. При наличии в пробе искомого антигена во время прохождения образца через абсорбирующее устройство происходит взаимодействие антигена с антителами, конъюгированными с детектируемой меткой, которая сопровождается образованием комплекса антиген-антитело. Этот комплекс затем связывается в аналитической зоне за счет взаимодействия с ним иммобилизованных специфических антител.
8атр1е рас!

Conjugate pad
Sample flow
TV«» hrw. Г' . 11: Membrane Absorbent pad