Разработка иммуностимулирующих комплексов на основе гликолипидов и тритерпеновых гликозидов из морских гидробионтов

• Автор: Мазейка, Андрей Николаевич
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 154 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммуностимулирующие комплексы

1.1.1 .Химический состав и структура иммуностимулирующих комплексов

1.1.2. Способы получения иммуностимулирующих комплексов

1.1.3. Адъювантная активность иммуностимулирующих

комплексов

1.1.4. Токсичность иммуностимулирующих комплексов

1.2.Иммуностимулирующие комплексы на основе гликоалкалоидов растений семейства пасленовые
1.3. Способы оптимизации иммуностимулирующих комплексов
1.3.1. Иммуномодулирующие свойства тритерпеновых гликозидов
голотурий
1.3.2. Токсические свойства тритерпеновых гликозидов голотурий
1.3.3. Мембранотропная активность тритерпеновых гликозидов
голотурий
1.3.4. Липиды как компоненты иммуностимулирующих комплексов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Биологический материал
2.2. Тонкослойная хроматография
2.3. Выделение гликоглицеролипидов
2.4. Выделение фосфатидилхолина
2.5. Анализ состава жирных кислот фосфо- и гликолипидов
2.6. Выделение кукумариозида Аг
2.7. ЯМР-спектроскопия

2.8. Получение липид-сапониновых комплексов
2.8.1. Получение комплексов тритерпеновый гликозид-холестерол
2.8.2. Получение тубулярных
2.8.3. Введение антигенов в тубулярный иммуностимулирующий
комплекс
2.9. Получение иммуностимулирующих комплексов
2.10. Электронная микроскопия
2.11. Определение полноты включения антигенов в тубулярный иммуностимулирующий комплекс
2.12. Реакция прямой гемагглютинации
2.13. Определение гемолитической активности
2.13.1. Реакция гемолиза
2.13.2 Реакция торможения гемолиза
2.14. Иммунизация животных
2.15. Получение сывороток крови
2.16. Анализ сывороток крови иммунизированных животных
2.17. Определение протективной активности
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Физико-химические свойства и ИСКОМ-формирующая способность
гликоглицеролипидов из морских макрофитов
3.2. Тритерпеновые гликозиды голотурий как потенциальные компоненты иммуностимулирующих комплексов
3.3. Комплекс тритерпеновый гликозид-холестерол как основа
иммуностимулирующего комплекса
3.4. Введение мембранных липидов в комплексы кукумариозид-холестерол и голотоксин А|-холестерол
3.5. Структура частиц тубулярного иммуностимулирующего комплекса

3.6. Гемолитическая активность комплексов голотоксин А! -холестрол-липид и кукумариозид-холестерол-липид
3.7. Способы введения антигенов в тубулярный иммуностимулирующий комплекс
3.8. Адъювантная активность тубулярного иммуностимулирующего комплекса моногалактозилдиацилглицерол-холестерол-кукумариозид
6:2:3
3.9. Оптимизация тубулярного иммуностимулирующего
комплекса
3.9.1. Оптимизация условий для формирования тубулярного иммуностимулирующего комплекса
3.9.2. Определение гемолитической активности оптимизированного тубулярного иммуностимулирующего комплекса
3.9.3. Устойчивость тубулярного иммуностимулирующего
комплекса
3.10. Адъювантная активность оптимизированного тубулярного
иммуностимулирующего комплекса
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

популяций иммунокомпетентных клеток в селезенке и красном костном мозге мышей после радиационного облучения в большой дозе (Гришин и др., 1990).
Учитывая выраженную токсичность тритерпеновых гликозидов голотурий, значительный интерес представляла иммуностимулирующая активность их комплексов с холестеролом, в составе которых их гемолитическая активность значительно снижена. В связи с этим было проведено исследование иммуномодулирующих свойств препарата «Кумазид», представляющего собой комплекс суммы моносульфатированных тритерпеновых гликозидов из С. japonica с холестеролом в молярном соотношении 1:2 (Aminin et al., 2010b). Было показано, что в составе комплекса моносульфатированные тритерпеновые гликозиды снижают свою токсичность в 10-20 раз, сохраняя, при этом иммуностимулирующие свойства. Вместе с тем, действующие дозы «Кумазида» минимум на порядок больше, чем у свободных тритерпеновых гликозидов. Так, «Кумазид» при внутрибрюшинном введении (1 мкг) вдвое увеличивал лизосомальную активность перитонеальных макрофагов мыши. In vitro «Кумазид» усиливал хемилюминесценцию нейтрофилов человека в концентрации 10 мкг/мл, тогда как меньшие концентрации приводили к некоторой супрессии. Фагоцитарная активность нейтрофилов увеличивалась на 20% при трехчасовой инкубации с препаратом в концентрации 0.1 и 1 мкг/мл, тогда как инкубация в течение меньшего времени или с большей концентрацией приводила к супрессии фагоцитоза. Митотическая активность лимфоцитов периферической крови человека под действием «Кумазида» in vitro увеличивалась слабо (вдвое, против 20-30 кратного увеличения под действием фитогемагглютинина). В концентрациях
0.1 - 10 мкг/мл препарат стимулировал продукцию FNO-a и IL
мононуклеарами периферической крови человека in vitro; максимальная стимуляция наблюдалась при концентрации 10 мкг/мл и составляла 2.3 и 13.3 раза соответственно, тогда как повышение концентрации INF-у происходило лишь при самой высокой концентрации и достигало 7.5 раз. «Кумазид» в дозе 1 мкг/мл in vitro оказался способен восстанавливать экспрессию CD3, CD4, CD8