Апоптоз-модулирующие эффекты биназы в фагоцитирующих клетках

• Автор: Миронов, Владислав Алексеевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 132 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клеточная гибель

1.1.1. Формы гибели клетки

1.1.2. Апоптоз

1.1.3. Регуляция механизмов апоптотической гибели

1.1.4. Некроз

1.1.5. Роль липидов в программируемой клеточной гибели

1.1.6. Активные формы кислорода

1.1.7. Токсическое действие активных форм кислорода
1.1.8. Окислительный стресс и клеточная гибель
1.2. Фагоцитирующие клетки. Особенности функционирования
1.2.1. Защитная функция фагоцитирующих клеток
1.2.2. Моноциты/макрофаги
1.2.3. Гетерогенность моноцитов/макрофагов
1.2.4. Моноциты/макрофаги во врожденном иммунитете
1.2.5. Регуляция клеточной смерти и выживаемости
моноцитов и макрофагов
1.2.6. Гранулоциты
1.2.7. Модуляция апоптоза нейтрофилов
1.3. Биологическая активность экзогенных рибонуклеаз
1.3.1. Некоторые особенности биологического
действия экзогенных рибонуклеаз
1.3.2. Реализация цитотоксичности РНКаз
1.3.3. Олигомеризация как один из критериев цитотоксичности РНКаз.,

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2Л. Объект исследования
2.2. Биологические материалы
2.2.1. Выделение суспензии лейкоцитов периферической крови
2.2.2. Выделение перитонеальных макрофагов крысы
2.3. Проточная цитометрия
2.3.1. Подготовка клеточных проб для анализа апоптоза
2.3.2. Определение экспрессии фосфатидилсерина и
проницаемости цитоплазматической мембраны
2.3.3. Детекция АФК в тесте РЬа§оЬигз1®
2.4. Влияние биназы и Н2О2 на жизнеспособность,
апоптоз и некроз макрофагов
2.5. Оценка интенсивности реакций перекисного окисления липидов в макрофагах методом Ре2+-индуцированной хемилюминесценции
2.6. Исследование основного фазового перехода фосфолипидных
везикул БРРС методом ДСК
2.6.1. Приготовление образцов
2.6.2. Калориметрические измерения
2.7. Получение и характеристика химически "сшитого" димера биназы
2.7.1. Методика получения
2.7.2. Определение РНКазной активности
2.7.3. Распределение в двухфазной системе бутанол/вода
2.8. Влияние мономера и димера биназы на
апоптоз перитонеальных макрофагов крысы
2.9. Атомно-силовая микроскопия
2.10. Расчет феноменологических параметров
2.11. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ЗЛ. Действие бииазы на апоптоз субпопуляций лейкоцитов
крови человека
3.2. Действие биназы на апоптоз и некроз макрофагов крысы в модели пероксид-индуцированного окислительного стресса
3.3. Сравнение протекторного эффекта биназы в
мононуклеарных фагоцитах крысы и моноцитах человека
3.4. Оценка интенсивности реакций ПОЛ в макрофагах методом Ре2+-индуцированной хемилюминесценции
3.5. Изучение взаимодействия фосфолипидных везикул с биназой методом ДСК
3.6. Влияние биназы на индукцию активных форм кислорода в гранулоцитах и моноцитах
3.7. Исследование влияния биназы на ФМА-индуцированный
апоптоз в гранулоцитах и моноцитах
3.8. Оценка апоптогенного эффекта мономера и димера биназы в перитонеальных макрофагах крысы
3.8.1. Свойства димера биназы
3.8.2. Влияние на апоптоз
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Избирательное действие биназы на спонтанный и пероксид-индуцированный апоптоз моноцитов
4.2. Протекторный эффект биназы в перитонеальных макрофагах крысы
4.3. Влияние биназы на свойства цитоплазматической мембраны
4.4. Гипотетическая модель протекторного и апоптоз-модулирующего эффектов биназы в мононуклеарных фагоцитах
4.5. Влияние биназы на индукцию АФК в гранулоцитах и моноцитах
4.6. Влияние биназы на ФМА-индуцированный апоптоз в гранулоцитах и моноцитах

В-лимфоцитам, экспрессируют IL-12, IL-23 и другие воспалительные цитокины, продуцируют АФК и монооксид азота, реализуя тем самым свою противоопухолевую функцию [Sica et al., 2007]. Напротив, макрофаги М2 или опухоль-ассоциированные макрофаги (ОАМ) содействуют экспрессии противовоспалительных цитокинов и важны для прогрессии опухоли [Sica et al., 2007; Luo et al., 2006]. М2 клетки представлены разнообразными подтипами, не имеющими сходства с классическими макрофагами Ml, которые выполняют антиопухолевую программу.
Макрофагальные подтипы не могут быть предопределены заранее, а 'программируются' или 'образуются' микросредой опухоли. Следовательно, 'перепрограммирование' М2 клеток в фенотип Ml может обеспечить новый способ лечения, основанный на инфильтрации моноцита/макрофага в ткань опухоли [Eubank et al., 2009].
1.2.4. Моноциты/макрофаги во врожденном иммунитете
Активация моноцитов/макрофагов наступает при связывании разнообразных специализированных мембранных и внутриклеточных рецепторов аутологичными или ксеногенными стимулирующими лигандами. Моноциты/макрофаги экспрессируют антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС) первого и второго классов классов (МНС-I и MHC-II).
В узнавании чужеродных лигандов важная роль принадлежит Toll-подобным рецепторам. У моноцитов и макрофагов семейство Toll-подобных рецепторов составляет группа из 9 типов рецепторных молекул, которые распознают консервативные структуры микроорганизмов. TLR 1, 2, 4, 5, 6 и 10 идентифицированы в плазматической мембране. TLR 3, 7 и 9 найдены в мембранах эндосом, при этом TLR9 обнаружен только в эндосомных мембранах в моноцитах. TLR4 связывает ЛПС - главный компонент внешней стенки грамотрицательных бактерий, один из наиболее изученных активаторов моноцитов/макрофагов [Akira et al., 2001]. В целом, стимуляция