Иммунологические и биохимические факторы в формировании окислительного стресса при атерогенезе

• Автор: Ложкин, Андрей Петрович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 145 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Атеросклероз как многофакторное заболевание

1.2. Основные стадии атерогенеза

1.2.1. Инициация атеросклеротического повреждения

1.2.2. Инфильтрация моноцитов

1.2.3. Прогрессия

1.2.4. Разрыв бляшки
1.3. Гипотезы происхождения атеросклероза
1.3.1. Модификационная гипотеза
1.3.2. Аутоиммунная гипотеза
1.3.3. Гипотеза митохондриальной дисфункции
1.3.4. Инфекционная гипотеза
1.4. Аутоиммунная сторона атеросклероза
1.4.1. Атеросклероз как аутоиммунное заболевание
1.4.2. Аутоантигены, обнаруженные в атеросклеротических бляшках
1.4.2.1. Липопротеины низкой плотности
1.4.2.2. Белки теплового шока
1.4.2.3. Фрагменты, экспрессируемые погибающими клетками
1.4.3. Врожденный иммунитет в атерогенезе
1.4.3.1. Скевинджер рецепторы
1.4.3.2. Toll-like рецепторы
1.4.4. Приобретенный иммунитет в развитии атеросклероза
1.4.5. CD40-CD40L взаимодействие и его роль в атерогенезе
1.5. Окислительный стресс в атерогенезе
1.5.1. Основные типы активных форм кислорода и их функции в клетке
1.5.2. Окислительный стресс в кардиологии
1.5.3. Генерация АФК NAD(P)H оксидазами, ксантин оксидазами, NO-синтазами
1.5.4. Продукция АФК митохондриальной ЭТЦ
1.5.5. Сигнальные функции АФК в клетках эндотелия
1.5.6. Факторы иммунной системы в формировании окислительного стресса

1.5.7. Антиоксидантная система
1.5.8. Супероскид дисмутазы в стенке сосуда
1.6. Биомаркеры нестабильности и разрушения атеросклеротической бляшки
1.6.1. Маркеры острой фазы воспаления
1.6.1.1. С-реактивный белок
1.6.1.2. Сывороточный амилоид А
1.6.2. Цитокины и хемокины
1.6.2.1. Интерлейкин
1.6.2.2. Интерлейкин
1.6.2.3. Моноритарный хемоаттрактивный белок
1.6.3. Плацентарный ростовой фактор
1.6.4. Окисленные липопротеины низкой плотности1
1.6.5. Факторы антиоксидантной системы
1.6.5.1. Глутатион пероксидаза
1.6.5.2. Супероксид дисмутаза
1.6.6. Миелопероксидаза
1.6.7. Матриксные металлопротеиназы
1.6.8. Растворимый СВ40Б
1.7. Железо, медь, цинк в стенке сосуда, про- и антиатерогенные функции ионов металлов
1.8. Физико-химические и молекулярные механизмы кальцификации
стенки сосуда
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Биологические образцы
2.1.1. Атеросклеротические бляшки
2.1.2. Подопытные животные
2.2. Физико-химические методы
2.2.1. Приготовление базового раствора зонда ТМТН
2.2.2. Определение активных форм кислорода в стенках аорты методом ЭПР
2.2.3. Выявление участия в реакции Фентона металлов с переменной валентностью в составе атеросклеротической бляшки
2.2.4. Ксантиноксидазная реакция
2.2.5. Количественное определение содержания элементов в атеросклеротической бляшке

2.2.6. Обнаружение парамагнитных центров двухвалентного
марганца в образцах атеросклеротических бляшек
2.3. Физиолого-биохимические методы
2.3.1. Стимуляция мышей фактором некроза опухолей ТНФ-альфа
2.3.2. Получение образцов плазмы мышей
2.3.3. Смыв перитонеальных макрофагов
2.3.4. Цитометрия с использованием иммобилизованных на частицах антител (Cytometric bead array analysis, СВА)
2.3.5. Анализ содержания цитокинов
2.3.6. Определение концентрации хемокинов
2.3.7. Количественный анализ фосфорилированных киназ
2.3.8. Определение общего содержания белка в образцах лизатов клеток
2.3.9. Анализ концентрации сывороточного амилоида А
2.3.10. Определение концентрации лептина в плазме мышей
2.3.11. Анализ концентрации инсулина в плазме крови мышей
2.4. Методы работы с клетками и тканями мышей
2.4.1. Выделение спленоцитов
2.4.2. Негативная селекция Т-клеток
2.4.3. Анализ чистоты и популяционной принадлежности Т-клеток
2.4.4. Активация Т-клеток
2.4.5. Активация клеток жировой ткани мышей
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Содержание элементов в образцах стенок сосудов
3.1.1. Содержание ряда элементов и корреляционный анализ'
3.1.2. Обнаружение комплексов двухвалентного марганца методом высокочастотного ЭПР
3.2. Продукция АФК в образцах стенок сосудов
3.2.1. Анализ данных динамики накопления нитроксильного радикала
3.2.2. Окислительный стресс в образцах стенок сосудов
3.2.3. Протекание реакции Фентона в атеросклеротических бляшках
3.3. Иммунологические аргументы участия CD40-CD40L в формировании окислительного стресса в атерогенезе
3.3.1. Измерение синтеза цитокинов. в плазме мышей с дефицитом рецептора CD40
3.3.2. Модуляция синтеза цитокинов введением анти-СО40

Как и другие хронические воспалительные заболевания аутоиммунного происхождения, так и атеросклероз зависит от дефицита регуляторных Т-клеток и их функций. Показано, что обычно реакцию к HSP сдерживают натуральные регуляторные Т-клетки, а продуцируемый ими цитокин - TGF- р играет важную роль в подавлении развития атеросклероза. И наконец, обнаружено, что перенос активных регуляторных Т-клеток генетически предрасположенным к атеросклерозу мышам значительно уменьшает повреждения сосудов [Hansson, Libby, 2006].
Функция регуляторных Т-клеток также ограничивать активность неспецифичных к собственным антигенам Т-клеток и некоторые патогены используют их для снижения иммунного ответа. В атеросклеротической бляшке обнаружено 1-5% регуляторных Т-клеток от общего числа Т-клеток, в то время как в нормальной артерии - 25%, что свидетельствует о сниженной защите толерантности при атеросклерозе [De Boer et al., 2007]. Снижение регуляторных Т-клеток значительно увеличивает развитие бляшек [Ait-Oufella et al., 2006]. Резюмируя сказанное выше, накопление в стенке сосуда ЛПНП и последующее развитие атеросклеротических повреждений ассоциированы с образованием модифицированных собственных антигенов организма. Поскольку часть из них потенциально токсична для окружающих клеток, представляется вполне логичным, что иммунная система стремится распознать и удалить эти антигены - своего рода защитная аутоиммунная функция. Эта функция должна быть строго регулируемой во избежание паталогических процессов в стенке артерий. Вероятно, стимуляция регуляторных Т-клеток должна предупреждать развитие заболевания. Обратная сторона этого подхода в том, что если регуляторные Т-клетки станут чересчур иммуносупрессивными, понизится как CD8+ зависимая устойчивость к развитию опухолей, так и защита от инфекций. Поэтому подобная терапия, активирующая регуляторные Т-клетки должна быть антиген специфической и не выходить за рамки атеросклеротической бляшки.