Моделирование синуклеинопатии у трансгенных животных с целью изучения механизма действия нейропротекторных препаратов

• Автор: Устюгов, Алексей Анатольевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

Оглавление
Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Современные представления о механизме действия отечественного

препарата димебон как эффективного нейропротекторного агента

Характеристика димебона

Свойства димебона как когнитивно-стимулирующего агента

Димебон и нейродегенерация

Использование генетических моделей для изучения нейродегенеративных

процессов
Этиология и патогенез протеинопатии на примере болезни Паркинсона
Синуклеинопатии как новая нозологическая форма
Участие альфа-синуклеина в нейродегенеративных процессах
Моделирование синуклеинопатий методом генетического
модифицирования экспрессии гена в модельных организмах
Современные линии трансгенных мышей с пан-нейрональной экспрессие
гена синуклеина
Линии трансгенных мышей с экспрессией гена альфа-синуклеина в
нейронах
Моделирование протеинопатии и роль эндогенного белка на примере
синуклеинопатии у беспозвоночных животных
Развитие нейродегенеративных процессов и функция альфа-синуклеина

Разработка новых подходов в лечении протеинопатий на примере генетической модели с измененной экспрессией синуклеина
Глава 2. Методы и материалы
Получение трансгенных животных с пан-нейрональной экспрессией гамма-
синуклеина
Лабораторные животные
Г енотипирование
Введение препарата димебон
Характеристика полученных животных
Методы анализа состояния нервной системы экспериментальных
животных
Тест «вращающийся стержень»
Тест «горизонтальная перекладина»
Анализ походки
Гистологический анализ образцов тканей нервной системы
экспериментальных животных
Фиксация и заключение в парафин
Приготовление гистологических срезов
Окрашивание Конго красным и подсчет амилоидных отложений
Иммуногистохимический анализ
Анализ содержания и клеточной локализации белков
Выделение белка
Фракционирование белков
Анализ белков в денатурирующем 808-РА0Е
Иммуноблоттинг белков
Анализ экспрессии РНК
Выделение РНК
Глава 3. Результаты и обсуждение
Моделирование протенопатии
Характеристика синуклеинопатии, вызванной в трансгенных мышах со сверхэкспрессей гена гамма-синуклеина
Анализ экспрессии трансгена на уровне мРМК
Анализ экспрессии трансгена на уровне белка
Гистологический анализ нервной системы Т11у1ту8И трансгенных
животных
Патологические включения, образованные агрегированным гамма-
синуклеином
Убиквитип и гамма-синуклеинопатия
Анализ нейровоспалительных процессов, сопровождающих
протеинопатию
Анализ детергент нерастворимых фракций содержащих гамма-синуклеин

Прогрессирующий характер развития протеинопатии в трансгенных
животных
Использование модельной системы гамма-синуклеинопатии для изучения
механизма действия отечественного препарата димебон
Инструментальные тесты трансгенных животных со сверхэкспрессией:
гамма-синуклеина принимающих димебон
Влияние димебона на образование амилоидных включений и астроглиоз в тканях нервной системы трансгенных животных с прогрессирующей
протеинопатией
Эффект димебона на смертность гамма-синуклеин трансгенных
животных
Потенциальный клеточный механизм действия димебона
Выводы
Список литературы

Встаёт вопрос об относительной легкости моделирования в трансгенных мышах изменений, характерных для MCA по сравнению с изменениями, характерными для БП. Весьма вероятно, что олигодендроциты в норме практически не синтезирующие альфа-синуклеин значительно более чувствительны к форсированной экспрессии гена этого белка, чем нейроны, которые приобретают «толерантность» к альфа-синуклеину в процессе онтогенеза. Это напоминает ситуацию с экспрессией этого белка в нейронах беспозвоночных, которая рассмотрена в следующем разделе.
Моделирование протеинопатии и роль эндогенного белка на примере си-нуклеинопатии у беспозвоночных животных
При сравнении результатов анализа линий, трансгенных мышей, которые синтезируют укороченные формы альфа-синуклеина человека в дофами-нергических нейронах, необходимо отметить, что мыши, экспрессирующие укороченную форму гена альфа-синуклеина (al-120) (Tofaris, G. К. et al., 2006); не имеют эндогенного альфа-синуклеина, и это могло сказаться на характере изменений, которые были индуцированны экспрессией трансгена. К сожалению, данные о фенотипе мышей, этой трансгенной линии в присутствии эндогенного альфа-синуклеина пока не доступны. Однако эффект усиления патологических изменений, которые вызваны экспрессией гена экзогенного альфа-синуклеина в животных без эндогенного альфа-синуклеина был описан другими исследователями (Cabin, D. Е. et al., 2005) или может быть обусловлен исходя, из более чётко выраженного фенотипа таких животных (Chandra, S. et al., 2005; Gallardo, G. et al., 2008) по сравнению с фенотипом животных других линий, полученных аналогичным образом, но имеющих эндогенный белок.
Модели, которые воспроизводят основные признаки синуклеинопатий, можно достаточно просто получить на беспозвоночных животных и тем самым объяснить необходимость отсутствия эндогенного альфа-синуклеина.