Вирусные и невирусные методы введения в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот

• Автор: Ризванов, Альберт Анатольевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 283 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AAV (Adeno Associated Virus) — адено-ассоциированный вирус

ANDV (Andes Virus) — вирус Andes

CMV (Cytomegalovirus) — цитомегаловирус

CTE (Constituent Transport Element) — конститутивный транспортный элемент

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) — улучшенный зелёный флуоресцентный белок FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting) — флуоресцентно-активируемая клеточная сортировка FBS (Fetal Bovine Serum) — фетальная телячья сыворотка GPC (Glycoprotein Precursor) — белок-предшественник гликопротеинов F1CMV (Fluman Cytomegalovirus) — цитомегаловирус человека HLA (Human Leucocyte Antigen) — главный комплекс гистосовместимости F1NTV (Hantaan Virus) — вирус Hantaan KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin) — гемоцианин Fissurella El CAM (LI Cell Adhesion Molecule) — молекула нейральной адгезии LI LD50 (Lethal Dose, 50%) — средняя смертельная (летальная) доза MCMV (Mouse Cytomegalovirus) — цитомегаловирус мыши MOl (Multiplicity Of Infection) — множественность инфицирования ORF (Open Reading Frame) — открытая рамка считывания PBS (Phosphate Buffered Saline) — фосфатно-солевой буфер PCMV (Peromyscus Cytomegalovirus) — цитомегаловирус Peromyscus PEI (Polyethylene Imine) — полиэтиленимин PFA (Phosphonoformic Acid) — фосфономуравьиная кислота PFU (Plaque Forming Unit) — колониеобразующая единица PMEC {Peromyscus maniculatus Embryonic Cells) — эмбриональные клетки Peromyscus maniculatus

PRE (Posttanscriptional Regulatory Element) — посттранскрипционный регуляторный элемент RCMV (Rat Cytomegalovirus) —цитомегаловирус крысы RdRp (RNA Dependent RNA Polymerase) — РНК-зависимая РНК-полимераза RRE (Rev Response Element) —- Rev-элемент ответа
SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis) — полиакриламидный гель, электрофорез в денатурирующих условиях shRNA (short hairpin Ribonucleic Acid) — короткая шпилечная РНК siRNA (small interfering Ribonucleic Acid) — короткая интерферирующая РНК
SNV (Sin nombre Virus) — вирус Sin nombre SOD1 (Superoxide Dismutase 1) — супероксиддисмутаза 1 VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) — сосудистый эндотелиальный фактор роста
wtPCMV (Wild Type Peromyscus Cytomegalovirus) — Peromyscus цитомегаловирус дикого типа АГ —- аппарат Гольджи АТ — антитела
ВИЧ — вирус иммунодефицита человека
ВЭЖХ —• высокоэффективная жидкостная хроматография
ГЛПС — геморрагическая лихорадка с почечным синдромом
ГСК — гемопоэтические стволовые клетки
ДМСО — диметилсульфоксид .
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота ИФА — иммуноферментный анализ
кДНК — комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота
ОТ-ГГТТР — обратная транскрипция — полимеразная цепная реакция ПК — пуповинная кровь
ПНР — полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ — полимеразная цепная реакция в реальном времени РНК — рибонуклеиновая кислота т.п.н. — тысяч пар нуклеотидов XJIC — хантавирусный лёгочный синдром ЦНС — центральная нервная система ЭР — эндоплазматический ретикулум OD (Optical Density) - оптическая плотность GPC (GlycoProtein Precursor) - предшественник гликопротеинов IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium) — среда Дульбекко, модифицированная Исковым RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute medium 1640) — среда для культивирования клеток №1640, разработанная в Институте раковых исследований Розвелла Парка DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) — среда Игла, модифицированная Дульбекко HN (Human Nuclei) — ядерный антиген человека

иммуногенность и онкогенность. Более того, аденовирусные векторы не применимы для лечения заболеваний, требующих долговременной экспрессии трансгена в клетках-мишенях, а эффективность ретровирусных векторов первых поколений была относительно низкой (Corrias, Scuderi, Pasino, Biglino, Восса, Marotta, Figini, Pistoia and Mori, 1998). Именно поэтому в последнее время началось усиленное исследование в области разработки невирусных методов генной доставки, таких как электропорации (в особенности нуклсофекции) и липофильной трансфекции, которые могут быть безопасным способом направленной генетической модификации клеток пуповинной крови. Оба метода могут быть перспективными при переносе генов в ГСК для применения в клинике, т.к. минимизируют возможность развития патологических генетических изменений и иммунных реакций. Определение наиболее оптимального подхода доставки генетического материала требует проведения сравнительного анализа нуклеофекции и жизнеспособности трансфицированных клеток (Oldak, Kruszewski, Machaj, Gajkowska and Pojda, 2002).
Трансплантация генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповинной крови была в основе методов клеточной и генной терапии ишемических болезней (Ikeda, Fukuda, Wada, Matsumoto, Satomi, Yokoyama, Saito, Matsumoto, Kanmatsuse and Mugishima, 2004). Образование и условия дифференцировки дендритных клеток из трансфицированных CD34 k-клеток пуповинной крови изучали для иммунотерапии онкозаболеваний (Wu, Smith and Dolan, 2001). Другими словами, работы по созданию генетически модифицированных клеток для клеточной терапии различных заболеваний уже начаты и проходят экспериментальный анализ эффективности в лабораторных условиях.
Моделирование нейродегенеративных заболеваний. Для изучения влияния конкретных генов на развитие заболевания широко применяют