Участие липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I в механизмах внутриклеточной регуляции и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки

• Автор: Суменкова, Дина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 281 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общие представления о липопротеинах плазмы крови
1.2. Липопротеины высокой плотности: структура и свойства
1.3. Аполипопрогеин А-1: структура и свойства
1.4. Метаболизм липопротеинов высокой плотности
1.5. Рецепторы и белки, связывающие липопротеины
высокой плотности
1.6. Регуляторная и транспортная роль липопротеинов
высокой плотности и аполипопротеина А-1
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Используемые реактивы и оборудование
2.3. Экспериментальные модели
2.3.1. Культура клеток
2.3.2. Модель туберкулезного воспаления
2.4. Препаративные процедуры
2.4.1. Выделение липопротеинов плазмы крови
2.4.2. Выделение аполипопротеинов
2.4.3. Получение сыворотки крови
2.4.4. Выделение клеток .животных
2.4.4.1. Изолирование и фракционирование клеток печени
2.4.4.2. Выделение перитонеальных макрофагов
2.4.4.3. Выделение асцитных опухолевых клеток и опухоль-ассоциированных макрофагов

2.4.4А. Оценка чистоты клеточных фракций, подсчет клеток и
определение их жизнеспособности
2.4.5. Получение гомогената ткани печени и
выделение фракции лизосом
2.4.6. Выделение плазматических мембран
2.5. Биохимические методы
2.5.1. Определение содержания белка
2.5.2. Оценка скорости биосинтеза белка и нуклеиновых кислот
2.5.3. Определение содержания лактата
2.5.4. Определение содержания ИЛ-1р
2.5.5. Определение активности ферментов лизосом
2.5.5.1. Определение активности катепсина О
2.5.5.2. Определение активности кислой фосфатазы
2.5.5.3. Определение активности хитотриозидазы
2.5.6. Определение внеклеточной ДНК
2.5.7. Оценка апоптоза
2.5.8. Флуорохромирование апоА-1 и его лигандов
2.5.9. Изучение белкового спектра: электрофорез в
полиакриламидном геле и иммуноэлектроблоттинг
2.5.10. Изучение взаимодействия липопротеинов и их
белковых компонентов с лигандами
2.5.10.1. Тушение триптофановой флуоресценции
2.5.10.2. Электрофорез в геле агарозы
2.5.10.3. Гель-фильтрация
2.5.10.4. Равновесный диализ
2.6. Морфологические методы
2.7. Статистические методы обработки результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Изучение транспорта аполипопротеина А-1 в ядра клеток
3.2. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с биологически активными веществами различной природы
3.2.1. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 со стероидными гормонами
3.2.2. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с полисахаридами
3.2.3. Анализ взаимодействия липопротеинов высокойплотности и аполипопротеина А-1 с лекарственными препаратами
3.2.4. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с генетическим материалом
3.3. Роль липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 в комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтетических процессов в нормальных и опухолевых клетках. Конкурентный эффект аполипопротеина Е
3.3.1. Роль липопротеинов высокой плотности в комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтеза белка в нормальных и опухолевых клетках
3.3.2. Роль аполипопротеина А-Гв комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в гепатоцитах
3.4. Влияние липопротеинов высокой плотности и их комплексов с полисахаридами на продукцию интерлейкина-1 р
спиралей, 9% - ß-структур и 33% - не организованной структуры [Swaney J.B. et al., 1977]. Тем не менее, в структуре крысиного и человеческого апоА-1 имеется большое сходство, особенно это касается N-терминального участка. По крайней мере, 14 из 21 аминокислотного остатка N-терминального конца одинаковы, что составляет для этого фрагмента 67%. Однако есть и различия. Так, пролин в 4 и 6 положениях апоА-I человека отсутствует у соответствующего белка крыс, а лейцин в положении 13 заменен на фенилаланин. В целом, степень гомологии апоА-I человека и крысы составила лишь 41% [Poncin J.E. et al., 1984].
Синтезируется апоА-I в печени и стенке тонкой кишки [Gordon J.M. et al., 1982; Stoffel W., 1984]. Есть данные о синтезе апоА-I в скелетных мышцах цыплят [Tarugi Р. et al., 1989]. Авторы показали, что апоА-I мРНК кодирует продукт трансляции, состоящий из 267 аминокислот, включающий сигнальный пептид, или препропептид (18 аминокислотных остатков) и пропептид с известной аминокислотной последовательностью (арг-гис-фен-три-глн-глн). Пропептид прикреплен к N-терминальному домену апоА-1.
Препропептид апоА-I подвергается внутриклеточному микросомальному посттрансляционному отщеплению с помощью трипсиноподобной протеазы. ПроапоА-1 (апоА-I изоформа) является основной изоформой белка, секретируемой печенью и кишечником. В плазме и лимфе это минорный белок, а основными являются зрелые формы апоА-1 (А-1-0, A-I-1 и A-I-2 изоформы). Период полужизни проапоА-1 составляет около 1,5 часов [Bojanovski D. et al., 1985]. В сыворотке крови под действием специфических пептидаз происходит протеолитическое отщепление пропептида с образованием зрелой формы апоА-I. Изучение ингибиторов пептидаз указывает на то, что это металлозависимые ферменты, к тому же они не являются сери новыми пептидазами.
У здоровых лиц примерно 88% общего пула апоА-I составляет апоА-1-0-форма, 7% — апоА-1-1, 4% белка представлено в виде проапоА-1-2 и 1% - в форме апоА-1-2 [Bojanovski D. et al., 1985]. Следует заметить, что апоА-