Генотипирование крупного рогатого скота по генам бета-лактоглобулина и каппа-казеина методами ДНК-технологии

• Автор: Зарипов, Олег Гаязович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 130 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Аллельный полиморфизм генов бета-лактоглобулина

и каппа-казеина

1.1.1. Бета-лакто глобулин

1.1.2 Каппа-казеин

1.2. Молекулярно-генетическая диагностика сельскохозяйственных

животных
1.2.1. Методы выделения нуклеиновых кислот
1.2.2. Методы амплификации нуклеиновых кислот
1.2.3 Детекция результатов полимеразной цепной реакции
1.3. Методы, используемые для определения аллельного
полиморфизма
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Оптимизация техники выделения ДНК из крови и спермы

3.2. Оптимизация техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования
крупного рогатого скота по гену бе га-лактоглобулина
3.3. Оптимизация техники ПЦР-ПДРФ для генотипирования
крупного рогатого скота по гену каппа-казеина
3.4. Разработка способа проведения высокоточной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по гену каппа-казеина

Разработка способа проведения аллель-специфичной ГІЦР для гепотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена
каппа-казеина
Оценка полиморфизма локуса генов бета-лактоглобулина
и каппа-казеина у крупного рогатого скота
Полиморфизм гена бета-лактоглобулина у коров
Полиморфизм гена бета-лактоглобулипа
у быков-производигелей
Полиморфизм гена каппа-казсина у быков-производителей
Молочная продуктивность коров с разными генотипами
бета-лактоглобулина
Качество и технологические свойства молока коров с разными
генотипами бета-лактоглобулина
Состав молока и его физико-химические показатели у коров
с разными генотипами бета-лактоглобулина
Сыропригодность молока коров с разными генотипами
бета-лактоглобулина
Термостабильность молока коров с разными генотипами
бета-лактоглобулина
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота.
ДСН - додецилсульфат натрия (SDS - sodium dodecyl sulfate).
ДТТ - дитиотрейтол (DTT - dithiotreitol).
ДХН - дезоксихолат натрия (SDC - sodium deoxycholate).
ПДРФ - полиморфизм длины рестрикционных фргаментов (RFLP — Restriction Fragment Length Polymorphism).
ПЦР - полимеразная цепная реакция (PCR - Polymerase Chain Reaction).
РНК - рибонуклеиновая кислота.
ЭДТА -этилендиаминтетрауксуая кислота (EDTA - ethylenediaminetetraacetic acid
ЭКЕ - энергетическая кормовая единица.
Ьр - base pair (и.о. - пары оснований).
А - adenosine (А - аденозин).
ARMS-PCR - Amplification Refractory Mutation System-Polymerase Chain Reaction (разновидность аллель-специфичной ПЦР с рефракторными праймерами.
ASA- allele specific amplification (АСА-аллель-специфичная амплификация). AS-PCR — Allele-Specific-Polymerase Chain Reaction (аллель-специфичная полимеразная цепная реакция).
С - cytosine (Ц - цитозин).
CSN3 (кСп) — каппа-казеин.
dATP - deoxyadenosinetriphosphate (дАТФ - дезоксиаденозинтрифосфат). dCTP - deoxycytidinetriphosphate (дЦТФ - дезоксицитидинтрифосфат). dGTP - deoxyguanosinetriphosphate (дГТФ - дезоксигуанозинтрифосфат). dNTPs - deoxynucleosidtriphosphates (дМТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты). dTTP — deoxythymidinetriphosphate (дТТФ — дезокситимидинтрифосфат).
G - guanosine (Г - гуанозин).
PAGE - polyacrylamide gel electrophoresis (Электрофорез в Г1ААГ — электрофорез в полиакриламидном геле).
RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) - произвольная амплификация полиморфных локусов ДНК.
SNP- Single Nucleotide Polymorphism (полиморфизм единичных нуклеотидов).
SSCP — Single Strand Conformation Polymorphism (конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК).
Т - thymidine (Т - тимидин).
TUL1PS-PCR — Touch-Up and Loop Incorporated PrimerS (разновидность «Touch-Up» ПЦР с инвертированными праймерами). ß-Lg (ß-LGB) - бета-лактоглобулин.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования по теме диссертации проводились в период с 2006 по 2009 гг. на кафедре технологии животноводства ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», в ООО «Дусым» Атнинского района, а также в ГУП головном племенном предприятии «Элита» Высокогорского района Республики Татарстан.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Научно-хозяйственные опыты поставлены согласно схеме исследования (рис. 1).
Для определения полиморфизма генов бета-лактоглобулина и оценки хозяйственно-полезных признаков у животных с разными генотипами бета-лактоглобулина, было отобрано в ООО «Дусым» 158 черно-пёстро х голштинских коров. Наряду с этим, для определения полиморфизма гена бета-лактоглобулина и каппа-казеина были отобраны 70 быков-производителей в ГУП ТПП «Элита». В нашем исследовании использовались как чистопородные, так и помесные по голштинской породе быки-производители, все быки имели комплексный класс элита-рекорд. Оценку полиморфизма генов бета-лактоглобулина и каппа-казеина проводили на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для дальнейшего исследования согласно принципа аналогов (А.И. Овсянников, 1976), по результатам генотипировария по гену бета-лактоглобулина были сформированы 3 группы черно-пёстро х голштинских коров. В первую группу включены первотёлки с генотипом бета-лактоглобулина ВВ (контрольная группа), во вторую — генотипом AB, в третью - генотипом АА. Объем проведенных исследований представлен в таблице 1.
Наряду с экспериментальными материалами использовались данные зоотехнического и племенного учета ООО «Дусым», то есть следующие документы: материалы годовых отчётов, материалы бонитировки, племенные свидетельства, документы первичного зоотехнического учета (карточки коров и быков - форма 1-MOJI, 2-MOJT, а также акты контрольных доек).