Регуляция воспалительных реакций в легком при экспериментальном туберкулезе

• Автор: Евстифеев, Владимир Васильевич
• Шифр специальности: 14.03.09, 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель и задачи исследования
Научная новизна
Практическая значимость исследования
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Введение
1.2. Взаимодействие M.tuberculosis с мононуклеарными фагоцитами
хозяина
1.3. Нейтрофилы и туберкулез
1. 4. Воспаление при туберкулезе
1.4. 1. Образование гранулем
1. 4. 2. Регуляция воспаления
1. 4. 3. Цитокины семейства IL-
1. 5. Заключение
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Лабораторные животные
2.2. Микобактериальные культуры
2.3. Заражение М. tuberculosis H37Rv
2.4. Определение количества микобактерий в органах зараженных животных
2.5. Антигены
2.6. Среды и растворы
2.7. Получение поликлональных антител к IL-11 мыши

2.8. Получение суспензии клеток легкого
2.9. Получение суспензии клеток костного мозга
2.10. Получение культуры ДК
2.11. Нагрузка ДК антигеном
2.12. Иммунизация ДК
2.13. Анализ клеток методом проточной цитофлуориметрии
2.14. Определение продукции цитокинов
2.15. Выделение суммарной РНК из суспензии клеток
2.16. Получение кДНК
2.17. Определение продукции цитокинов и хемокинов клетками методом ПЦР в реальном времени
2.18. Определение продукции цитокинов и хемокинов клетками легкого
методом микроэррей
2.19. Фракционирование и извлечение ДНК из агарозных
гелей
2.20. Приготовление компетентных клеток Escherichia coli
2.21. Трансформация клеток Е. coli
2.22. Проверка индукции синтеза рекомбинантных белков в штамме Ml
E.coli
2.23. Электрофорез белков в полиакриламидном геле
2.24. Определение растворимости белков
2.25. Получение препаративных количеств рекомбинантных белков
2.26. Выделение и очистка белков методом металл-хелатной хроматографии
2.27. Гистологические исследования

2.21 Л. Приготовление крио-срезов
2.27.2. Приготовление парафиновых блоков
2.28. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Модулирование воспаления введением диклофенака и выращенных in vitro дендритных клеток
3.2. Роль IL-11 в воспалении
3.2.1. При туберкулезной инфекции у генетически чувствительных мышей увеличивается уровень IL-
3.2.2. Блокирование 1L-11 антителами
3.2.3. Клеточная инфильтрация и иммунный ответ в легких
3.2.4. Аутокринная регуляция IL-11 на уровне транскрипции
3.2.5. Блокировка рецептора IL-11 мутантной формой IL-11.
3.2.5.1. Получение искусственного гена il-11 и его мутанта
3.2.5.2.Изучение влияния рекомбинантного 1L-11 дикого типа и его мутантной формы на течение экспериментального ТБ
3.3. Блокировка туберкулезного воспаления ткани легкого пептидом NBD
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ЛИТЕРАТУРА

100 КОЕ/мышь. Для аэрозольного инфицирования использовали камеру Full Body Inhalation Exposure System (Glas-Col, США).
Внутритратрахеальное заражение проводили под гексеналовым наркозом (1мг/г веса). У мышей вскрывали трахею и вводили в нее 50мкл суспензии, содержащей М. tuberculosis штамма H37Rv 103 КОЕ/мышь в 0,05 мл PBS.
2.4. Определение количества микобактерий в органах зараженных
животных
На разные сроки после заражения определяли количество микобактерий во внутренних органах. Для этого стерильно выделяли легкие и селезенки зараженных животных, гомогенизировали в 2 мл физиологического раствора, готовили серийные десятикратные разведения гомогенатов органов и высевали на чашки Петри с агаром Дюбо (Difco) по 50мкл на чашку. Чашки Петри с нанесенными суспензиями инкубировали при 37°С, через 18-20 дней подсчитывали количество макроколоний М. tuberculosis H37Rv на чашке и пересчитывали их количество на орган (КОЕ/орган) по следующей формуле: N =2Nі х Р/0.
N - количество колоний в органе;
Ni - количество колоний на чашке;
Р - разведение исходной суспензии.
2.5. Антигены
В качестве антигена в экспериментах использовали соникат М. tuberculosis H37Rv - растворимую фракцию разрушенных ультразвуком М.