Искусственные ассоциации бактерий Rhizobium leguminosarum с корнями томата и табака, трансгенными по гену psl лектина гороха

• Автор: Благова, Дарья Константиновна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 116 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

Глава 1 Обзор литературы

1.1. Бактерии семейства Rhizobiaceae как PGPR и возможности их применения

1.1.1. Прямые механизмы влияния ризобий на рост растений

1.1.2. Контроль фитопатогенов

1.1.3. Защитное действие ризобий при загрязнении почв тяжелыми металлами и использование их в

биоремедиации

1.1.4. Колонизация ризобиями корней небобовых растений и методы ее улучшения

1.2. Лектины бобовых растений и их роль в азотфиксирующем симбиозе

1.3. Растения, трансгенные по генам лектинов бобовых
растений
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Объекты исследования, бактериальные штаммы и
векторы
2.2. Олигонуклеотидные праймеры, использованные при проведении

2.3. Реактивы и материалы
2.4. Составы использованных стандартных водных растворов
2.5. Методы исследований
2.5.1. Выделение и очистка ДНК растений
2.5.2. Выделение и очистка РНК растений
2.5.3. Синтез к ДНК
2.5.4. Выделение и очистка плазмидной ДНК
2.5.5. Полимеразная цепная реакция
2.5.6. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами

2.5.7. Аналитический гель-электрофорез ДНК
2.5.8. Подготовка компетентных клеток E. coli
2.5.9. Трансформация компетентных клеток E. coli плазмидной ДНК
2.5.10. Автоматическое секвенирование ДНК ферментативным методом
2.5.11. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
2.5.12. Приготовление электрокомпетентных клеток Agrobacterium sp
2.5.13. Электропорация компетентных клеток Agrobacterium sp
2.5.14. Получение композитных растений
2.5.15. Анализ ß-глюкуронидазной (gus) активности
2.5.16. Агробактериальная трансформация листовых пластинок табака
2.5.17. Оценка антагонистической активности бактерий
2.5.18. Проверка штаммов бактерий на синтез сидерофоров
2.5.19. Проверка штаммов бактерий на синтез цианида (HCN)
2.5.20. Обработка «бородатых корней» микросимбионтами на томатах, микроскопирование и оценка количества адгезированных на корнях бактерий
2.5.21. Совместная обработка растений патогенным грибом Fusarium oxysporum f.sp lycopersicum и бактериями R. leguminosarum
2.5.22. Определение содержания кадмия в растениях табака
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Получение флуоресцентно меченых штаммов ризобактерий
3.2..Получение трансгенных бородатых корней на растениях томата и
анализ их колонизации клубеньковыми бактериями R. leguminosarum
3.3. Изучение защитных свойств ризобий при заражении растений патогенными грибами
3.3.1. Поиск штаммов бактерий обладающих фунги статической активностью
3.3.2. Идентификация бактерий методом секвенирования гена 16S рРНК
3.3.3. Исследование синтеза бактериями фунгистатических метаболитов

3.3.4 Совместная обработка растений С. охуьрогит /л/л ycopersici и /?. /е£иттояагит
3.4. Изучение влияния ризобий на растения табака при загрязнении почвы кадмием
3.3.1. Получение штаммов ризобий с псевдофитохелатиновым геном
3.4.2. Влияние ризобий на содержание кадмия в растениях табака
3.5. Создание векторных конструкций с геном лектина под контролем корнеспецифичного промотора ИВ
3.5.1. Клонирование двух вариантов промотора 13В7 в векторе рСатЫа 1281 Ъ
3.5.2. Проверка специфичности промотора в трансгенных растениях
табака
3.5.3. Клонирование гена рэ1 под контролем промотора ГСВ7/2 в векторе рСатЫа 1
3.5.4. Получение растений табака, экспрессирующих ген лектина под управлением промотора Ш37/2.
Заключение
Выводы
Список сокращений и условных обозначений
Список литературы

5-бромо-4-хлоро-3-индолил-Р-0-галактопиранозид (Boehringer Mannheim, ФРГ)
Бромфеноловый синий (Serva, ФРГ)
Г ентамицин
Гексадецилтриметиламмоний бромид (HDTMA ) (Sigma Aldrich, США)
Г игромицин Глицерин (Serva, ФРГ)
Дезоксинуклеотидтрифосфаты: дАТФ (Pharmacia, Швеция) дЦТФ (Pharmacia, Швеция) дГТФ (Pharmacia, Швеция) дТТФ (Pharmacia, Швеция)
Дезоксихолат натрия (Serva или Merck, обе ФРГ)
ДНК-лигаза фага Т4 (MBI Fermentas, Литва)
Додецилсульфат натрия (ДДС-натрия) (Serva, ФРГ)
Дрожжевой экстракт (Difco, США)
Кальций хлористый (Merck, ФРГ)
Канамицин моносульфат (Serva, ФРГ).
Лизоцим (Serva, ФРГ)
Магний хлористый (Serva, ФРГ)
Обратная транскриптаза AMV (Promega Corporation, США)
7,4-пиперазиндиэтансульфоновая кислота (Pipes) (Sigma Aldrich, США) Полиэтиленгликоль 6000 (Fluka, Швейцария или Merck, ФРГ) Рестрикционные эндонуклеазы:
Xhol (Fermentas, Литва)
Nhel (Fermentas, Литва)
7ïcoRl(Fermentas, Литва)
Smal (Fermentas, Литва)
Тетрациклин (Serva, ФРГ)
Трис (гидроксиэтиламинометан) "тризма" или "Sigma 7-9" (Sigma, США)