Фармакогеномные исследования эффективности лечения рассеянного склероза иммуномодулирующими препаратами

• Автор: Царёва, Екатерина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1.1. Основные аспекты иммунопатогенеза PC и подходы к его лечению

иммуномодулирующими препаратами

1.1.1. Основные аспекты иммунопатогенеза PC

1.1.2. Патогенетическое лечение больных PC иммуномодулирующими

препаратами

1.2. Фармакогенетические исследования эффективности лечения ПИТРС больных PC

1.2.1. Фармакогенетические исследования эффективности ИФПб при PC

1.2.2. Фармакогенетические исследования эффективности ГА при PC

1.3. Обоснование выбора генов для фармакогенетического исследования эффективности иммуномодулирующей терапии у русских больных PC
1.3.1. Ген HLA-DRB1
t 1.3.2. Ген CCR5
1.3.3. Гены провоспалительных цитокинов: TNFи IFNG
1.3.4. Гены противовоспалительных цитокинов: TGFB1 и IFNB1
1.3.5. Ген CTLA4
1.3.6. Ген IFNAR1
1.3.7. Ген IL7RA
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Использованные реактивы
2.2. Объект исследования
2.3. Полиморфные локусы генов, анализ которых проводили в работе
2.4. Выделение геномной ДНК из периферической крови больных PC
2.5. Геномное типирование
2.5.1. Геномное типирование локуса HLA-DRB1
2.5.2. Геномное типирование полиморфного участка “дикий тип—>делеция 32-х
п.н. в гене CCR5 (w—>d, rs333)
2.5.3. Геномное типирование SNP -308G>A в гене TNF (rs 1800629)
2.5.4. Геномное типирование SNP 874Т>А в гене IFNG (rs2430561)
2.5.5. Геномное типирование SNP -509С>Т в гене TGFB1 (rsl800469)
2.5.6. Геномное типирование SNP 153Т>С в rmelFNBl (rsl051922)
2.5.7. Геномное типирование SNP 49A>G в гене CTLA4 (rs231775)
2.5.8. Геномное типирование SNP 16725G>C в гене IFNAR1 (rs 1012335)

2.5.9. Геномное типирование Ь№ С—>Т в экзоне 6 гена/7,7А4 (гя6897932)
2.6. Статистический анализ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Анализ вклада полиморфизма генов-кандидатов в эффективность лечения больных РС препаратом ГА при сравнении больных с оптимальным ответом на лечение ГА и больных
без оптимального ответа (всех остальных больных РС)
3.1.1. Сравнительная характеристика групп больных РС (Я та N11)
3.1.2. Анализ индивидуального вклада аллелей/генотипов генов-кандидатов в эффективность лечения ГА при сравнении больных с оптимальным ответом на
лечение и без оптимального ответа на лечение ГА (Я та N11)
3.1.3. Анализ совместного вклада аллелей/генотипов генов-кандидатов в эффективность лечения ГА при сравнении больных с оптимальным ответом на
лечение и без оптимального ответа на лечение ГА (Я та N11)
3.2. Выявление генетических маркеров эффективности лечения ГА, при сравнении больных с оптимальным ответом на терапию ГА и больных, характеризующимися полным отсутствием ответа на лечение (сравнение «крайних» групп, Я та ОКЯ)
3.2.1. Сравнительная характеристика групп больных (Я то ВЫЯ)
3.2.2. Анализ индивидуального вклада аллелей/генотипов генов-кандидатов в эффективность лечения Г А при сравнении больных с оптимальным ответом на лечение и ГА и больных, характеризующимися полным отсутствием ответа на
лечение (Я та БИЯ)
3.2.3. Анализ совместного вклада аллелей/генотипов генов-кандндатов в эффективность лечения Г А при сравнении больных с оптимальным ответом на лечение и больных, характеризующихся полным отсутствием ответа на терапию
ГА (ЯтаЭКЯ)
3.3. Анализ природы кумулятивного вклада аллелей ССЛ5*с1, 7ЖВ7*15, 7’GFS7*Tи
ШЫАЮ* в в составе сочетаний в эффективность лечения препаратом Г А больных РС
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АПК - антиген-презентирующие клетки;
ВПРС - вторичного-прогрессирующая форма рассеянного склероза;
ГА - глатирамера ацетат;
ГЭБ - гемато-энцефалический барьер;
ДИ - доверительный интервал;
ИЛ - интерлейкин;
ИФНб - интерферон-бета;
ИФНб-1а - рекомбинантный интерферон-бета человека, вырабатываемый в культуре клеток млекопитающих;
ИФНб-lb-рекомбинантный интерферон-бета человека, вырабатываемый штаммом E. coli: ИФНг - интреферон-гамма;
ЛТ - лимфотоксин;
МАГ - миелин-ассоциированный гликопротеин;
ММП - матриксные металлопротеиназы;
МИК - мононуклеарные клетки;
МОГ — миелин-олигодендроцитарный гликопротеин;
МРТ- магнитно-резонансная томография;
ОБМ - основный белок миелина;
ОШ - отношение шансов;
ПИТРС - препараты, изменяющие течение рассеянного склероза;
ПЛП - протеолипидный пептид;
ПИРС - первично-прогрессирующая форма PC;
PC - рассеянный склероз;
РРС - ремитирующая форма рассеянного склероза;
ТРФ61 - трансформирующий ростовой фактор бета 1;
ФИО - фактор некроза опухолей;
ЦНС - центральная нервная система;
ЦСЖ - церебро-спиналоная жидкость;
ЭАЭ - экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит;
BAFF - фактор активации В-лимфоцитов;
BDNF - нейротрофический фактор мозга;
CCR5 - рецептор СС-хемокинов 5;
CCR5 - ген, кодирующий рецептор СС-хемокинов 5;
CTLA4 - антиген 4 цитотоксических Т-лимфоцитов;

Интерфероны типа I, к которым относится ИФНб, связываются с общим рецептором IFNAR. Две субъединицы этого рецептора - 1FNAR1 и IFNAR2 - кодируются двумя различными генами, IFNARJ и IFNAR2, расположенными на хромосоме 21 в области 21q22.1. Несколько исследований было направлено на выявление ассоциации различных полиморфных маркеров в генах IFNAR1 и IFNAR2 с эффективностью лечения больных PC препаратами ИФНб, однако трудно назвать их всеобъемлющими. В работе Sriram и соавт., проведенной на больных PC испанского происхождения [144], была выявлена ассоциация аллеля rsl012334*A (SNP 16469 (А/Т) в третьем нитроне гена IFNAR1) с отсутствием обострений и увеличением показателя EDSS в течение двух лет после начала лечения (р = 0.03). Однако в этом же исследовании при разделении больных на группы с помощью критериев, учитывающих динамику изменения клинических параметров (снижение частоты обострений на 30% и отсутствие обострений в течение 2 лет после начала лечения) не было обнаружено значимых ассоциаций исследуемых полиморфизмов с эффективностью лечения ИФНб. Leyva и соавг. анализировали в качестве возможных фармакогенетических маркеров три полиморфизма, исследованные ранее в работе Sriram (однако rs 1012334 среди них не было) также у испанских больных PC. Ассоциаций с эффективностью лечения ИФНб для выбранных SNP выявлено не было. В дальнейшем была выявлена слабая ассоциация количества GTn повторов в промоторной области гена IFNAR1 (р=0.036) [149] и rs2248202 в гене IFNAR2 {р = 0 04) [161] с эффективностью лечения ИФНб.
Одной из возможных причин благоприятного воздействия ИФНб при лечении больных PC является регуляция баланса цитокинов. Фармакогенетические исследования затронули лишь несколько генов про- и противовоспалительных цитокинов. При изучении влияния динуклеотидных микросателлитных повторов в первом интроне гена IFNG, у испанских больных PC, получающих терапию ИФНб, было выявлено различное распределение аллелей IFNG среди групп больных без обострений и больных, у которых обострения продолжались (р = 0.005-0 04) [154]. Wergeland и соавт. выявили различное распределение гаплотипов трех SNP в промоторной области гена IL10 в группах норвежских больных PC с различной эффективностью лечения ИФНб, используя в качестве критерия оценки эффективности терапии данные МРТ (р = 0.04) [147] Эти данные были подтверждены исследованиями O’Doherty et al. [155], в которых, в частности, было показано что аллели генов IL10 и IL10RB (субъединица рецептора ИЛ-10) входят в состав сочетаний, ассоциированных с эффективным лечением ИФНб (р = 0.0004 - 0.00019). Полученные результаты дают основание предполагать непосредственную связь различных полиморфизмов в регуляторных частях генов цитокинов и эффективностью