Исследование изменчивости ДНК периферической крови людей, подвергшихся радиационному воздействию

• Автор: Митрошина, Ирина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 132 с. : ил.

Оглавление
Введение
1 Обзор литературы
1.1 Детекция молекулярных нарушений для целей
диагностики и мониторинга некоторых онкологических патологий
1.1.1 Молекулярные маркеры для диагностики и
мониторинга рака молочной железы
1.1.1.1 Ранняя диагностика рака молочной железы
1.1.1.2 Прогнозирование течения рака молочной железы
1.1.2 Молекулярные маркеры для диагностики и мониторинга
рака легких
1.1.2.1 Ранняя диагностика рака легких
1.1.2.2 Прогнозирование течения рака легких
1.2 Методы лечения онкологических патологий молочной
железы и легких. Воздействие на неопухолевые ткани
1.2.1 Радиотерапия в лечении рака молочной железы
и рака легких
1.2.2 Химиотерапия в лечении рака молочной железы
и рака легких
1.3 Источники внеклеточной ДНК
1.3.1 Ядерная ДНК
1.3.2 Митохондриальная ДНК
1.4 Полиморфизм ДНК человека на разных уровнях
организации генома
1.4.1 Вариабельность мини - и микросателлитных повторов
в некодирующих областях генома человека
1.4.2 Вариабельность микросателлитных тринуклеотидных повторов (СТО)п в 3’ - нетранслируемой области гена
миотонической протеинкиназы человека

1.4.3 Неизвестные мутации митохондриальной ДНК
1.4.4 Количественные изменения нуклеиновых кислот,
циркулирующих в плазме крови
2 Методы и материалы
2.1 Исследуемые группы
2.2 Выделение ДНК
2.3 Анализ вариабельности микросателлитных повторов
2.4 Анализ частоты аллелей (СТО)п
2.5 Определение доли внеклеточной митохондриальной
ДНК с мутациями
2.6 Определение копийности ядерного АСТВ и
митохондриального N01 генов
3 Результаты исследований и обсуждение
3.1 Изучение изменчивости микросателлитных повторов ДНК
некодирующих областей генома
3.1.1 Изучение изменения уровня полиморфизма микросателлитных
повторов ДНК из периферической крови в отдаленные сроки после облучения
3.1.2 Изучение уровня полиморфизма микросателлитных
повторов после воздействия курсов радиационной и химиотерапии
3.1.3 Анализ частоты аллелей (СТО)п
3.1.4 Определение доли внеклеточной митохондриальной
ДНК с мутациями
3.1.5 Изменение соотношения числа копий митохондриального и
ядерного генов
4 Заключение
5 Выводы
6 Список сокращений
7 Список литературы

Введение
Актуальность проблемы. Ионизирующая радиация является неотъемлемым компонентом окружающей среды, однако при увеличении интенсивности превращается в негативный фактор воздействия на здоровье и благополучие человека. В настоящее время пагубность воздействие радиации не требует дополнительных доказательств в связи с активным изучением последствий атомных бомбардировок, аварийных ситуаций на АЭС и широким распространением радиоактивных элементов в окружающей среде. Эффекты острого воздействия больших доз радиации на организм человека и биоты выявлены и изучены достаточно хорошо. Однако биологическое воздействие малых доз ионизирующего излучения на живые организмы до сих пор изучено недостаточно. Нерешенным вопросом остается влияние хронического облучения в малых дозах, поскольку его эффекты нивелируются адаптацией организма с вовлечением комплекса процессов, реализующихся на клеточном, тканевом и организменном уровнях. Эффекты воздействия могут проявляться спустя годы после непосредственного контакта с источником излучения (Аклеев, 2009). Существуют способы количественной оценки повреждений, вызванных средними и большими дозами ионизирующей радиации. Они основаны на обнаружении мутаций в поврежденных радиацией областях ДНК, кодирующих белки. Такой подход имеет множество ограничений, связанных с поиском мест локализации генетических повреждений, невозможностью их обнаружения через длительные периоды времени. Эти ограничения можно преодолеть, расширяя число анализируемых мест в геноме. Для этого используют выявление полиморфизма микросателлитных локусов, известных своей вариабельностью и широким распространением в некодирующих областях ДНК человека (ENCODE Project Consortium, 2007). Неповторимость каждого генома обусловливает возможность

Однако один может не испытывать практически никаких проблем, в то время как другой будет страдать от множества побочных эффектов (Пристман 2011). В отличие от ближайших побочных эффектов, таких как алопеция, желудочно-кишечные расстройства, иммуносупрессия, отдаленные побочные эффекты химиотерапии встречаются реже, но могут существенно ухудшить качество жизни пациентки, излеченной от РМЖ.
Угнетение кроветворения в большинстве случаев является
дозолимитирующим фактором при химиотерапии по случаю онкопатологии. В норме влияние дозы химиопрепарата на клетки костного мозга имеет временный характер. Процесс продукции лейкоцитов (лейкопоэз) чрезвычайно чувствителен к цитостатическому подавлению. Содержание эритроцитов и тромбоцитов обычно изменяется медленнее, и может быть обнаружено только после нескольких циклов химиотерапии. Как правило, число лейкоцитов начинает снижаться на 5 - 7 день после введения дозы цитотоксического препарата и достигает своего минимального уровня примерно через 2 недели после инъекции. К концу 3 недели число лейкоцитов возвращается к исходному и становится более или менее близко к нормальному. Однако отмечены случаи тяжелой (IV степени) дозозависимой нейтропении. У многих пациентов наблюдаются нейтропеническая лихорадка, нейтропенический сепсис (Скил 2011, Пристман 2011).
Анемия на протяжении химиотерапии, по приблизительным оценкам, наблюдается у 20 - 60 % пациентов. При падении уровня гемоглобина ниже 10 г/дл признаки анемии становятся довольно очевидными, и в таких случаях назначается лечение.
Кардиотоксичность антиканцерогенных препаратов проявляется в виде различных нарушений, от не выявляемых на электрокардиограмме изменений ритма до стенокардии и инфаркта миокарда, которые могут привести к смерти. Хроническое поражение зависит от дозы и проявляется дилатационной кардиомиопатией и сердечной недостаточностью. Риск развития кардиомиопатии