Исследование взаимодействия полностью транс-ретиналя с компонентами фоторецепторной мембраны и ретиналь-переносящими белками

• Автор: Аболтин, Павел Валерьевич
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 85 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Строение глаза позвоночных

1.1.1 Сетчатка позвоночных

1.1.2 Пигментный эпителий

1.1.3 Межфоторецепторный матрикс

1.1.4 Фоторецепторные клетки и фоторецепторные мембраны

1.2 Фотоиндуцированные процессы в сетчатке и ПЭ

1.2.1 Фотолиз родопсина

1.2.2 Ретиноидный цикл
1.3 Повреждения элементов зрительной системы,
вызываемые светом
1.3.1 Фототермические повреждения
1.3.2 Фотохимические повреждения
1.4 Молекулярные механизмы фотохимического повреждения
1.4.1 Фотоиндуцированная генерация свободных радикалов
1.4.2 Фотосенсибилизирующие свойства хромофоров
сетчатки и ПЭ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. ЭПР спектроскопия
2.2 Лазерный импульсный фотолиз
2.3 Приготовление липосом
2.4 Приготовление ФРМ из наружных сегментов палочек сетчатки
глаз быка
2. 5 Выделение и очистка межфоторецепторного
ретиналь-связывающего белка
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ЗЛ Исследование ретиналь-белковых взаимодействий методом
спиновой ловушки
3.2 Исследование спектрально-кинетических характеристик
триплетного состояния АТЫ
3.2.1 Спектрально-кинетические характеристики 3АТИ
в растворах
3.2.2 Спектрально-кинетические характеристики триплетного состояния АТИ в липосомах
3.2.3 Спектрально-кинетические характеристики триплетного состояния АТИ в белковых растворах
3.2.4 АТИ в водных растворах белков в присутствии ФХ
3.2.5 Образование Шиффовых оснований АТИ
в фоторецепторной мембране
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК
СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Основная функция глаза - световосприятие и преобразование светового кванта в различимый сенсорный сигнал. Зрительный аппарат развивался для выполнения именно этой функции и максимально для нее приспособлен. Для восприятия света в широком диапазоне освещенностей сформировалось много как клеточно-молекулярных, так и физических механизмов адаптации органа зрения к тому диапазону освещенностей, в котором происходит функционирование того или иного вида животных. Однако, кроме того, что свет является носителем сенсорного сигнала, он может выступать и как физиологически опасный фактор. Причиной этого является то, что, взаимодействуя с различными светопоглощающими веществами - хромофорами - квант света может инициировать образование активных форм кислорода, которые, в свою очередь, могут оказывать повреждающее действие на молекулярные и клеточные структуры глаза, такие, как хрусталик, роговица и сетчатка [Островский М.А., 1982]. Хотя сам факт, что пребывание экспериментальных животных в условиях высоких освещенностей приводит как к снижению зрительных функций, так и к заметным морфологическим изменениям, известен давно, особую актуальность эта проблема получила в последнее время, когда было установлено, что в сетчатке при относительно высокой освещенности развивается апоптоз. Поскольку сетчатка является постмитотической нервной тканью и не восстанавливается при гибели клеток, то развитие апоптоза на протяжении всей жизни может иметь прямое отношение как к старению сетчатки, так и к развитию возрастных патологий зрения.
В сетчатке не так много видов фотосенсибилизаторов, и поиск хромофоров, ответственных за развитие апоптоза, а также механизмов светоиндуцированной генерации свободных радикалов имеет первостепенное значение как в фундаментальном, так и в прикладном смысле.

амплитуда сигнала ЭПР
Магнитное поле, Гс
Рис. 9. Зависимость амплитуды сигнала ЭПР спиновой ловушки ДЕПМПО (0.15 моль/л), растворенной в 0М80, от времени освещения.
2.2 Лазерный импульсный фотолиз
Метод наносекундного лазерного фотолиза со спектрофотометрической регистрацией позволяет регистрировать кинетику образования и гибели короткоживущих промежуточных продуктов путем наблюдения за изменением электронного спектра поглощения системы после вспышки. Использование в качестве источника возбуждения лазеров на красителях с перестраиваемой длиной волны излучения дает уникальную возможность осуществлять избирательный фотолиз монохроматическим светом в широком диапазоне длин волн.
В данной работе спектры поглощения и кинетику гибели промежуточных продуктов регистрировали с помощью установки лазерного фотолиза (схема на рисунке 10). Источником возбуждения служил азотный лазер 1Лч! 1000 (РЯА,