Исследование механизма образования двух пиков на кривой генерации тромбина и возможность применения этого эффекта для предсказания геморрагических осложнений

• Автор: Тарандовский, Иван Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 93 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Система свертывания крови

1.1.1. Структура системы гемостаза

1.1.2. Тромбоцитарный гемостаз

1.1.2. Плазменный гемостаз

1.2. Интегральные тесты оценки статуса системы свертывания

1.2.1. Стандартные времена свертывания

1.2.2. Тромбоэластография

1.2.3. Тромбодинамика
1.2.3. Тест генерации тромбина: основы метода
1.2.4. Тест генерации тромбина: использование богатой тромбоцитами плазмы
1.3. Разнообразие клинических фенотипов тяжелой формы гемофилии
1.4. Постановка задачи
Глава 2. Пациенты, материалы и методы
2.1. Основные растворы
2.2. Пациенты и здоровые доноры крови
2.3. Процедура забора крови
2.4. Выделение плазмы крови и приготовление суспензии тромбоцитов
2.5. Приготовление суспензии фосфолипидных везикул
2.6. Проведение теста генерации тромбина
2.7. Определение погрешности измерения концентрации тромбина в ТГТ
2.8. Проточная цитометрия для исследования активации суспензии тромбоцитов
2.9. Тромбоэластография в цельной крови
2.10. Проведение теста тромбодинамики
Глава 3. Результаты
3.1. Исследование влияния ингибиторов активации тромбоцитов на генерацию тромбина в РКР
3.2. Влияние ПГЕ1 на образование второго пика на кривой генерации тромбина в РКР
3.3. Исследование активации суспензии тромбоцитов
3.4. Влияние количества тромбоцитов на формирование двух пиков на кривой генерации тромбина в РЫР
3.5. Метод оценки параметров двухпиковых кривых генерации тромбина
3.6. Статистика параметров первого и второго пиков. Возможность создания новой модификации теста генерации тромбина
3.7 Исследование статуса свертывания у больных гемофилией
3.7.1 Уровень фУШ и АЧТВ
3.7.2 Тромбоэластография
3.7.3 Тромбодинамика
3.7.4 Генерация тромбина
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Эффекты ингибиторов активации тромбоцитов в тесте генерации тромбина
4.2/Клиническая значимость появления двух пиков на кривой генерацшГтромбина
4.3 Исследование статуса свертывания у больных гемофилией А
Выводы
Благодарности
Список литературы
Приложение
Список сокращений
АДФ, аденозиндифосфорная кислота АТФ, аденозинтрифосфорная кислота АПС, активированный протеин С АТІІІ, антитромбин III
АЧТВ, активированное частичное тромбопластиновое время
АТФ, аденозинтрифосфорная кислота
БСА, бычий сывороточный альбумин
ВМК, высокомолекулярный кининоген
ГКІІ, гепариновый кофактор II
ГПУІ, гликопротеин VI
ГП1Ь/1Х/У, гликопротеин 1Ь/1Х/У
ГПІІЬІІІа, гликопротеин ІІЬІІІа
ДМСО, диметилсульфоксид
ИФА, иммуноферментный анализ
КГТ, кривая генерации тромбина
КТИ, корнтрипсин ингибитор, ингибитор трипсина из зерен кукурузы (ингибитор фактора ХИа)
МЕТ - АМФ, 2-метилтиоаденозин-5 ’-О-монофосфат МТФР, метилентетрагидрофолатредуктаза ПАИ-1, ингибитор активатора плазминогена
ПАИ-2, ингибитор активатора плазминогена
ПВ, протромбиновое время
ПГЕ1, простагландин Е
исследовании наблюдались большие разбросы между ЭТП. Получалось, что у значительной части пациентов ЭТП не отличался сильно между легким и тяжелым фенотипами гемофилии.
Таблица 2. Данные по пациентам с легким и тяжелым фенотипами гемофилий А и В*.
Cases. MB (mild bleeders) (n=22) All controls (n=50) Controls. SB (severe bleeders) (n=22) p vaJuc (Cases vs all controls) p value (MB vj SB)
Median age. yrs (IQR) 32 (27-43) 38(30-44) 38 (29-53) ns ns
Hemophilia B. % 7(32) 4 (8) 2(9) 0.03 ns
Median age al 1“ bleed, mos (IQR) 42(12-75) 12 0 2-24) 12(12-15) <0.01 <0.
Median age al 1“ joint bleed, mos (IQR) 84(36-108) 24(21-48) 24(12-36) <0.01 <0.
Median number of bleeds/vr. (IQR) 0(0-1) 20(9.5-31.5) 36 (25-39) <0.01 <0.
Median factor consumption. IU/kg/yr (IQR) 60(37-158) 1957 (862-2238) 2207(2113-2790) <0.01 <0.
Median orthopaedic joint score (range) 3 (0-7) 15(9-24) 18(13-28) <0.01 <0.
Median Fcttersson score (range) 18 (9-25) 35 (25-46) 44 (22-50) <0.01 <0.
Median FVIH antigen. lU/dL (IQR) 1.4 KO.5-3.5) <0.5 K0.5-0.7) <0.5 (<0.5-0.8) 0.02 ns
Median FIX antigen. HJ/dL (IQR) 9.9 (0.8-148.0) <0.5 (<0.5-0.8) <0.5 ( <0.5) 0.02 0.
Median ETP in PRP. n.M x min (IQR) 850 (476-1145) 460(137-830) 414(136-994) 0.0! 0.
Null mutations. % 2/20 (10) 28/48 (58) 13/21 (62) <0.01 <0.
PTG2G2I0A. % 1/21 (5) 2(4) 0 ns П
FV Leiden. % 0 3(6) 1 (4.5) ns ns
* Столбцы слева направо: легкий фенотип гемофилии (А или В); все остальные пациенты (пациенты со средним и тяжелым фенотипом); тяжелый фенотип; значение р при сравнении пациентов с легким фенотипом и всеми остальными; значение р при сравнении пациентов с легким и тяжелым фенотипами. Строки сверху вниз: средний возраст; число больный гемофилией В, средний возраст первого кровотечения, средний возраст первого суставного кровотечения; средняя частота кровотечений; потребление дефицитного фактора; средний ортопедический балл, показывающий состояние суставов; индекс Петтерсона состояния суставов [222]; средний уровень антигена фУІІІ; средний уровень антигена фГХ; среднее значение ЭТП в PRP; число нулевых мутаций недостающего фактора; число носителей мутации протромбин G20210A; число носителей фУ Лейден. В скобках ячеек таблицы указаны либо доля от общего числа в процентах, либо интерквартильный размах (IQR), либодиапазон значений (range). Воспроизведено из работы [177].