Изучение механизмов ингибирующего действия полиэлектролитов в отношении парамиксо - и ортомиксовирусов : корь и грипп

• Автор: Артюшенко, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 03.02.02, 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 94 с. : ил.

Оглавление

Список используемых сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Полиэлектролиты

1.1.1. Основные свойства полиэлектролитных комплексов

1.1.2. Основные свойства белок - полиэлектролитных комплексов

1.1.3. Применение синтетических полиэлектролитов В биотехнологии

1.2. Вирус кори

1.3. Вирус гриппа

1.3.1. Классификация вирусов гриппа

1.4. Химиотерапия кори и гриппа
1.5. Круговой дихроизм
1.5.1. Плоско, циркулярно и эллиптически поляризованный свет
1.5.2. Круговой дихроизм, эллиптичность и дисперсия оптического вращения
1.6. Спектроскопия
1.6.1. Абсорбционная спектроскопия
1.6.2. Ультрафиолетовая и видимая спектральные области
1.6.3. Спектрофотометры для измерений в УФ- и видимой областях
1.6.4. Абсорбционная спектроскопия белков в УФ области
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1 Вирусы
2.2. Полиэлектролиты (ПЭ)
2.3. Спектры флуоресценции и кругового дихроизма
2.4. Титрование вирусов
2.5. Статистическая обработка
2.6. Получение вирусных белков
2.7. Бислойные липидные мембраны
2.8. Коэффициент поверхностного натяжения
2.9. Цитотоксичность препаратов
2.10. Оценка выживаемости клеток
2.11. Определение 1С50
2.12. Определение активности нейраминидазы вируса гриппа волны 549 нм с соответствующим контролем
2.13. Определение типа ингибирования нейраминидазной активности вируса гриппа ПЭ комбинированным методом
Диксона и Лайнуивера-Берка
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Исследование токсичности используемых
полиэлектролитов
3.2. Изучение влияния ПЭ на инфекционность вирусов кори и гриппа
3.3. Изучение влияния ПЭ на физико-химические свойства бислойной липидной мембраны
3.4. Изучение ингибирования нейраминидазы (И) ПЭ ПСС-8 и ПАА
3.5. Определение типа ингибирования нейраминидазной активности вируса гриппа ПЭ ПСС-8 и ПАА (6 кДа)
3.6. Изучение кинетики инактивации нейраминидазы вируса
гриппа после взаимодействия с ПСС-8 и ПАА
Выводы
Список литературы
Список сокращений
ВПГ-1 — вирус простого герпеса 1 типа БЛМ - бислойные липидные мембраны КД - круговой дихроизм
МТТ — реагент 3-(4,5 — диметилтиазолил) - 2,5
дифенилтетразолий бромид
ОП - оптическая плотность
ПАА - полиаллиламин
ПСС - полистиролсульфонат
ПМАК - полиметакриловая кислота
ПЭВП - полиэтилен высокой плотности
ПЭ - полиэлектролиты
РНП - рибонуклеопротеид
ЦПД - цитопатогенное действие
ТРСК - три-тозил-1-фенилаланилхлорэтилкетон
ТЦД 50 - тканевая цитопатогенная доза, при которой погибает 50%
клеток от исходного количества
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
ЭПР - электронный парамагнитный резонанс
ЯМР - ядерно-магнитный резонанс
Н - гемагглютинин
N - нейраминидаза

организация липидных мембран обсуждается достаточно давно, однако, точного подтверждения такой организации липидных мембран пока нет. Между проникновением и стадией, чувствительной к актиномицину Б существует период (задержка), длительность которого для каждого инфицирующего вириона определяется случайными факторами. При множественности инфекции < 1 этот период равен 2,5 ч, но при высокой множественности он может уменьшиться до нуля. На этом основании вполне разумно для синхронизации инфекции использовать высокую множественность заражения.
Сборка вирионов гриппа происходит одновременно с их
высвобождением из клетки посредством почкования. Этот процесс
был детально изучен. Участки плазматической мембраны,
содержащие гемагглюгинин и нейраминидазу, образуют видимые
выросты примерно в то же самое время, когда на внутренней
стороне мембраны формируется новый слой белка (полипептид М)
этим морфологически измененным зонам мембран присоединяется
рибонуклеопротеид (РНП) и происходит почкование сферических
или нитевидных вирионов. Выделенные из зараженных клеток РНП
это короткие образования, длина которых соответствует длине
входящих в их состав молекул РРПС. Структурно они сходны с РНП,
выделенными непосредственно из вирионов, т.е. представляют собой
двойную спираль с одноцепочечной петлей на одном из концов.
Компанс и др. рассчитали, что вероятность точной комбинации
фрагментов РНП, случайно отбираемых из внутриклеточного пула
для включения в почкующийся вирион в среднем содержит избыток
таких фрагментов. Нейраминидаза попадает в определенные районы
плазматической мембраны приблизительно в то же время, что и
гемагглютинин, причем эти районы часто расположены около одног о