Пороговые свойства системы свертывания крови in vitro при активации тканевым фактором

• Автор: Баландина, Анна Николаевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил.

Список СОКРАЩЕНИЙ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о гемостазе человека

1.2. Плазменное свертывание крови

1.2.1. Состав и структура системы свертывания

1.2.2. Активация свертывания

1.2.3. Петли положительной обратной связи и образование комплексов

1.2.4. Формирование фибринового сгустка

1.2.5. Ингибиторы свертывания

1.3. Нарушения плазменного звена системы свертывания

1.3.1. Дефициты факторов свертывания

1.4. Экспериментальные модели свертывания крови
1.4.1. Модели свертывания in vivo и ex vivo
1.4.2. Пространственно-однородные модели
1.4.3. Пространственно-распределенные модели
1.5. Математические модели свертывания крови
1.5.1. Качественные и феноменологические модели
1.5.2. Количественные и механизменные модели
1.6. Пороговые свойства и роль обратных связей в in vitro моделях свертывания крови
1.7. Постановка задачи
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Доноры крови
2.3. Подготовка плазмы крови
2.3.1. Получение плазмы крови
2.3.2. Работа с замороженной плазмой
2.3.3. Стабилизация pH плазмы
2.3.4. Ингибирование контактной активации
2.3.5. Восполнение дефицитной плазмы факторами V, VII и VIII
2.3.6. Рекалъцификация плазмы
2.4. Стандартные тесты: АЧТВ и определение уровня фактора VIII

2.5. Приготовление пленок с фибробластами
2.5.1. Культура фибробластов
2.5.2. Подсчет плотности клеток
2.5.3. Посадка клеток на пленку
2.6. Приготовление пленок с иммобилизованным тканевым фактором
2.7. Иммобилизация тромбопластина на полистироловую поверхность
2.8. Определение плотности тканевого фактора
2.9. Экспериментальные системы
2.9.1. Пространственно-однородные эксперименты
2.9.2. Рост сгустка в пространстве
2.9.2.1. Конструкция кюветы
2.9.2.2. Схема и принцип работы установки
2.10. Программный комплекс получения и обработки экспериментальных изображений
2.10.1. Получение изображений
2.11.2. Обработка экспериментальных кадров
2.11. Математическая модель свертывания
2.11.1. Уравнения и параметры модели
2.11.2. Пространственно-однородная модель
2.11.3. Трехмерная пространственно-распределенная модель
2.11.3.1. Равномерное распределение тканевого фактора
2.11.3.2. Моделирование фибробластов
2.11.3.3. Исключение обратных связей из модели
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Порог по активации свертывания в пространственно-однородной системе
3.1.1. Свертывание в плазме здоровых доноров
3.2. Исследование роли положительных обратных связей при активации свертывания в пространственно-однородной системе
3.2.1. Изучение пороговых свойств системы свертывания в модели т зШсо
3.2.2. Свертывание в плазме, дефицитной по фактору V
3.2.3. Свертывание в плазме, дефицитной по фактору VIII
3.3. Порог по активации свертывания в пространственно-распределенной системе

3.3.1. Активация свертывания поверхностью с равномерно иммобилизованным тканевым фактором
3.3.2. Активация свертывания фибробластами
3.4. Исследование роли положительных обратных связей при активации свертывания в пространственно-распределенной системе
3.4.1. Исследование роли обратных связей в свертывании в математической модели
3.4.2. Планирование эксперимента для верификации модели
3.4.3. Экспериментальная проверка роли положительных обратных связей активации факторов V и VII
3.5. Динамика роста сгустка в плазме больных гемофилией А после восполнения фактором VIII
3.5.1. Рост сгустка у больных гемофилией А с различными фенотипами
3.5.2. Динамика изменения роста сгустка при введении пациентам фактора VIII
3.5.3. Корреляция скорости роста сгустка с параметрами А ЧТВ, уровнем фактора VIII в крови и клинической картиной у пациентов
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Регуляция свертывания в пространственно-однородной системе
4.2. Регуляция свертывания в пространственно неоднородной системе
4.3. Свертывание крови у пациентов с гемофилией
4.4. Новые представления о работе системы свертывания крови
4.5. Пространственная динамика свертывания как новый метод диагностики и оценки терапии
ВЫВОДЫ
Приложение 1. Уравнения и константы математической модели свертывания ... 114 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

экспериментальная кювета заполнялась ~1 мл плазмы крови, чашка Петри герметично закрывалась крышкой и помещалась в водяной термостат регистрирующей системы при 37°С. После юстировки оптической системы установки включалась программа захвата изображений Circle. Между рекальцификацией и заполнением кюветы обычно проходило 30 сек, а первый кадр записывался через 0.5-1.0 мин после заполнения кюветы. Кадры записывались каждые 30 сек, при этом снималось 10 кадров с интервалом 10 мсек, а усредненный кадр записывался на компьютер. Сгусток рос от вертикальной активирующей поверхности в тонком (1 мм) слое плазмы, ограниченной снизу чашкой Петри, а сверху - крышкой [80].
Рис. 2.3. Схема кюветы для установки 1. Детали устройства кюветы: крышка (1),
герметизирующая прокладка (2), полистироловая чашка Петри (3), активатор (4), исследуемая плазма (5), полистироловая крышка кюветы (6). Остальные пояснения см. в тексте. Воспроизведено из [80].
Установка 2 (Тромбоимиждер).
Кювета для установки Тромбоимиждер выполнена в виде вертикальной тонкостенной
емкости с каналом. На рисунке 2.4. слева показаны три составные детали кюветы, вырезанные из листа прозрачного полистирола при помощи технологии лазерной резки. Детали складываются между собой и проклеиваются по периметру клеем на основе дихлорэтилена. В получившуюся тонкую кювету с помощью лабораторной микропипетки заливается 50 мкл рекальцифицированной свободной от тромбоцитов плазмы. Затем в кювету вставляется вставка, на торце которой закреплен активатор свертывания. От этой поверхности и начинает расти фибриновой сгусток. Кювета освещается монохроматическим источником света, а пространственная динамика процесса свертывания регистрируется цифровой высокочувствительной фотокамерой.