Исследование неопиоидной рецепции β-эндорфина в доимплантационном развитии эмбриона мыши

• Автор: Чернов, Александр Сергеевич
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Ранний эмбриогенез млекопитающих: стадии и особенности раннего развития

1.2. Межклеточные взаимодействия и ростовые факторы в раннем развитии млекопитающих

1.3. Характеристика |3 - эндорфина

1.4. Характеристика иммуноглобулина И

1.5. Неопиоидное действие (3 -эндорфина

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Реактивы
2.2. Среды для работы с культурами клеток
2.3. Экспериментальные животные
2.4. Синтетические пептиды
2.5. Выделение и культивирование ранних эмбрионов мыши
2.6. Изучение действия Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина на раннее развитие эмбрионов мыши
2.7. Выделение и культивирование первичных эмбриональных фибробластов мыши
2.8. Оценка метаболической активности и жизнеспособности клеток
2.9. Методы измерения внутриклеточного Са2‘ у 2- и 8-клеточных эмбрионов мыши
2.9.1. Микроспектральный флуоресцентный анализ
2.9.2. Ратиометрический анализ
2.10. Вазэктомия самцов мыши
2.11. Трансплантация бластоцист псевдобеременным самкам мыши
2.12. Криоконсервация (витрификация) ранних эмбрионов мыши
2.13. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина на доимплантационное развитие эмбрионов мыши
3.1.1. Выбор эффективной концентрации исследуемых веществ
3.1.2. Развитие 2-клеточных эмбрионов
3.1.2.1. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина на развитие 2-клеточных эмбрионов мыши
3.1.2.2. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина в присутствии налоксона на развитие 2-клеточных эмбрионов мыши
3.1.3. Развитие 4-клеточных эмбрионов
3.1.3.1. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина на развитие 4-клеточных эмбрионов мыши
3.1.3.2. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина в присутствии налоксона на развитие 4-клеточных эмбрионов мыши
3.1.4. Развитие 8-клеточных эмбрионов
3.1.4.1. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина на развитие 8-клеточных эмбрионов мыши
3.1.4.2. Влияние Р-эндорфина, пентарфина и циклопентарфина в присутствии налоксона на развитие 8-клеточных эмбрионов мыши
3.2. Влияние Р-эндорфина и пентарфина на пролиферативную и митохондриальную активность первичных эмбриональных фибробластов мыши
3.3. Роль ионов Са2+ в развитии доимплантационных эмбрионов млекопитающих
3.3.1. Передача внутриклеточного сигнала при действии пентарфина и циклопентарфина на 2- и 8-клеточные эмбрионы мыши
3.3.2. Передача внутриклеточного сигнала при действии Р-эндорфина на 2- и 8-клеточные эмбрионы мыши
3.3.3. Ратиометрическое определение [Са2+]; у 2-клеточных эмбрионов
4. Действие циклопентарфина на выживаемость ранних эмбрионов при
криоконсервации (витрификации)
5. Исследование действиия циклопентарфина на постимплантационное
развитие
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
трансформированными Т-лимфоцитами человека ингибируется |3-эндорфином и Р-(Х>-А1а2]эндорфином, в то же время на связывание не влияют аналоги энефалина, (З-липотропин, инсулин, глюкагон, АКТГ, а-меланоцитстимулирующий гормон, опиоидные агонисты и антагонисты [Hazum, 1979]. Это открытие дало основание предположить наличие на лимфоцитах человека неизвестных рецепторов p-эндорфина неопиоидной природы. Было показано, что для связывания с этим рецептором необходим С-концевой участок молекулы Р-эндорфина, т.к. связывания а-эндорфина (первые 16 остатков Р-эндорфина) с данным рецептором не было обнаружено. Открытие специфических рецепторов Р-эндорфина неопиоидной природы позволило предположить, что некоторые центральные и периферические физиологические функции гормона могут осуществляться при помощи отличных от классических, связанных с опиоидными рецепторами, механизмов [Hazum et al., 1979]. Таким образом, рецепторные исследования доказали существование рецепторов p-эндорфина неопиоидной природы на Т-лимфоцитах человека, что позволяет объяснить .иммуномодулирующее действие гормона. Последующие исследования Гилмана и соавторов подтвердили результаты Хазума. Гилман впервые установил, что Р-эндорфин влияет на функциональную активность клеток иммунной системы [Gilman, 1982]. В присутствии р-эндорфина увеличивалась продукция митогенов Т-лимфоцитами человека. Гормон также способствовал пролиферации Т-клеток in vitro. Поскольку а-эндорфин не влиял на активность Т-лимфоцитов человека, был сделан вывод, что действие гормона осуществляется через рецептор, специфичный к С-концевой части молекулы Р-эндорфина [Gilman, 1982]. Таким образом, в этой работе авторы отметили неизвестное ранее действие пептидного гормона, а также высказали предположение, что это действие вызвано связыванием пептида с неизвестным рецептором. В этой же работе было установлено, что Р-эндорфин, связываясь с рецептором, нечувствительным к налоксону, увеличивает пролиферацию спленоцитов крысы, индуцированную