Взаимодействие сигнальной системы оксида азота со сфингомиелиновым циклом и пероксидным окислением при проведении токсического сигнала фактора некроза опухоли альфа в условиях ишемии-реперфузии печени

• Автор: Шупик, Мария Александровна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Свойства N0 и его физиологическое действие

1.2. Двойственный эффект N0 при апоптозе

1.2.1. Апоптотические свойства N0

1.2.1.1. Влияние N0 на функции митохондрий

1.2.2. Антиапоптотические свойства N0

1.2.2.1. Ингибирование апоптоза сСМР-зависимым путем

1.2.2.2. Ингибирование активности каспаз Б-нитрозилированием

1.3. Про- и антиоксидантные свойства N0
1.4. N0 и СФМ-цикл
1.4.1. СФМ-Цикл
1.4.2. Роль церамида в регуляции гибели клеток
1.4.2.1. Роль генерации N0 в клеточной гибели, индуцированной церамидом
1.4.2.2. N0 и ингибирование генерации церамида
1.4.2.3. Церамид и N0 при проведении сигнала апоптоза
1.4.3. Взаимосвязь сигнальных систем СФМ-цикла и окислительного стресса. Общие активаторы и ингибиторы
1.4.4. Взаимодействие N0, Т№-а и СФМ-цикла при апоптозе
1.4.4.1. Функциональные свойства ТЫР-а
1.4.4.2. ТЫР-а и пероксидное окисление липидов
1.4.4.3. ТЛР-а и СФМ-цикл
1.4.4.4. Роль N0 при передаче сигнала ТРР-а

1.5. N0 при ишемии-реперфузии
1.6. Роль ТКР-а при ишемии-реперфузии
Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1. Экспериментальные модели
2.1.1. Ишемия печени
2.1.2. Введение доноров N0, ТМ-а и церамида животным
2. 2. Препаративные методы
2.2.1. Получение гомогената ткани
2.2.2. Экстракция липидов из субклеточных структур
2.2.3. Синтез нитрозотиолов и ДНКЖ
2.3. Аналитические методы
2.3.1. Определение активности СФМаз
2.3.2. Определение содержания белка в гомогенате
2.3.3. Анализ фосфолипидов и церамидов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ)
2.3.4. Анализ продуктов ПОЛ
2.3.5. Электрофорез низкомолекулярной ДНК в агарозном геле
2.3.6. Идентификация Т№-а
2.3.7. Идентификация N0
2.3.8. Статистический анализ
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Изучение влияния соединений-доноров N0 на показатели СФМ-цикла (активность И-СФМазы, содержание СФМ и церамида) и продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты) в печени мышей
3.1.1. Влияние ДНКЖ на СФМ-цикл
3.1.2. Влияние ОБЫО на СФМ-цикл
3.1.3. Влияние №N02 на СФМ-цикл
3.1.4. Влияние доноров N0 на показатели ПОЛ (диеновые конъюгаты) в печени мышей

3.2. Изучение влияния ТИР-а на показатели СФМ-цикла (активность Г4-СФМазы и содержание церамида) и ПОЛ (диеновые конъюгаты) в печени мышей
3.2.1. Влияние ТЫР-а на показатели СФМ-цикла: активность М-СФМазы и содержание церамида в печени мышей
3.2.2. Влияние ТИР-а на показатели ПОЛ в печени мышей
3.3. Изучение влияния церамида на содержание ТЛР-а и продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты) в печени мышей
3.3.1. Влияние церамида на содержание ТЫР-а в печени мышей
3.3.2. Влияние церамида на содержание продуктов ПОЛ в печени мышей
3.4. Изучение содержания ТРЛ-а, продуктов ПОЛ, N0, и активности СФМаз при ишемии-реперфузии печени
3.4.1. Определение содержания ТМ-Чх при ишемии-реперфузии
3.4.2. Определение содержания диеновых конъюгатов при ишемии-реперфузии
3.4.3. Определение содержания N0 при ишемии-реперфузии
3.4.4. Изменение активности СФМаз при ишемии-реперфузии
3.4.4.1. Изменение активности И-СФМазы при ишемии-реперфузии
3.4.4.2. Изменение активности А-СФМазы при ишемии-реперфузии
3.4.5. Определение деградации ДР1К при ишемии-реперфузии
Заключение
Выводы
Список литературы

клеток карциномы. Также эти антиоксиданты ингибировали N-СФМазу и апоптоз, индуцированный даунорубицином или нуклеозидным аналогом 1-ß-D-арабинофуранозилцитозином в клетках лейкемии человека (Goni and Alonso, 2002).
Взаимосвязь между окислительным стрессом, образованием церамида и апоптозом была продемонстрирована при фотодинамической терапии на эмбриональных фибробластах мышей (Chiu et al., 2000), лимфобластах человека (Separovic et al., 1999) и при обработке линии клеток нейробластомы синтетическим ретиноидом 7У-(4-гидроксифенил)-ретинамидом, ингибитором канцерогенеза в ряде опухолевых моделей у животных (Maurer et al., 1999). Генерация АФК и активация СФМ-цикла наблюдались при гибели клеток, индуцированной ионизирующей или ультрафиолетовой радиацией. Так, при действии ультрафиолетового (УФ)-облучения на кератиноциты увеличивались содержание АФК и производство церамида (Maziere et al., 2001, Grether-Beck et al., 2000). В то же время витамин Е предотвращал действие УФ-облучения, а прооксидант L-бутионин-(8Д)-сульфоксимин, напротив, значительно повышал образование церамида, индуцированное УФ-облучением (Maziere et al., 2001). Индукция апоптоза ионизирующей радиацией, которая генерирует гидроксильные радикалы, также сопровождалась повышением содержания церамида (Verheij et al., 1996).
В экспериментах на животных показано пересечение сигнальных путей СФМ-цикла и ПОЛ, которые могут играть ключевую роль в развитии апоптоза. При добавлении глутатиона к клеткам in vitro (Liu and Hannun, 1997) и при его введении животным (Цюпко и др., 2001) наблюдается ингибирование СФМазы. При этом уменьшашается количество пероксидов, что подтверждает способность глутатиона как антиоксиданта подавлять окислительные процессы. Синхронность этих событий свидетельствует о зависимости СФМазы от интенсивности ПОЛ и, как следствие, от содержания продуктов ПОЛ.