Структурно-функциональные особенности белков в комплексах с полиэлектролитами и полиэлектролитными микрокапсулами

• Автор: Дурденко, Екатерина Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 115 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ
ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ С БЕЛКАМИ
1.1 УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОМПЛЕКСОВ БЕЛКОВ С
ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТАМИ
1.1.1 Конфигурация электростатического поля на поверхности белков и формирование надмолекулярных комплексов
1.1.2 Зависимость константы связывания полиэлектролитов с белками от ионной силы
1.1.3 Влияние ионов 1 офмейстера па стабильность белков в комплексах с полиэлектролитами
1.1.4 Анион-связывающие центры на белках и влияние некоторых анионов на стабильность белков
1.1.5 Роль гидрофобных взаимодействий в образовании полиэлектролит-белковых комплексов
Глава 2. ВЛИЯНИЕ СВОБОДНЫХ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ НА СТРУКТУРУ И ФУНКЦИИ БЕЛКОВ ПРИ ОБРАЗОВАНИИ КОМПЛЕКСА
Глава 3. ЗАРЯЖЕННЫЕ КОЛЛОИДНЫЕ ЧАСТИЦЫ В
БИОМЕДИЦИНЕ
Глава 4. ВЛИЯНИЕ ЗАРЯЖЕННЫХ КОЛЛОИДНЫХ ЧАСТИЦ НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. ОБЪЕКТЫ
1.1 Белки и ферменты
1.1.1 Лактатдегидрогеназа
1.1.2 Уреаза
1.1.3 Гемоглобин
1.2 Индольные производные
1.3 Полиэлектролиты
1.4 Неорганические соли и компоненты
2. МЕТОДЫ ИЗМЕРЕНИЯ
2.1 Определение активности ферментов
2.1.1 Активность лактатдегидрогеназы

2.1.2 Активность уреизы
2.1.3 Функциональную активность гемоглобина
2.2 Спектрофотометрические исследования
2.3 Флуориметрические исследования
2.4 Круговой дихроизм
2.5 Дифференциальная сканирующая микрокалориметрия
2.6 Измерение скорости тепловой денатурации лактатдегидрогеназы
2.7 Получение микросферолитов СаССГ
2.8 Формирование полиэлектролитных микрокапсул на микросферолитах СаСО,
2.9 Формирование фосфолипидых везикул
2.10 Инкубация белков с микрокапсулами и полиэлектролитами
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 5. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ БЕЛКОВ С ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТАМИ. ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСА
5.1 Влияние полиэлектролитов на флуоресценцию производных
индола — аналогов триптофановых остатков в белке
5.2 Влияние полиэлектролитов на флуоресценцию триптофановых остатков в белках
5.2.1 . 1актатдегидрогеиаза
5.2.2 Уреаза
5.2.3Гемогяобин
5.3 Особая роль ионов фосфата в стабилизации белка от разрушающего действия полиэлектролита
5.3.1 Влияние ионов фосфата на ферментативную активность
ЛД1' в комплексе с ПСС
5.3.2 Влияние ионов фосфата на флуоресцентные свойства комплекса ЛД1
5.4 Влияние ионов фосфата на стабильность лактатдегидрогеназы при тепловой денатурации
5.5 Влияние аниона сульфата на структурно-функциональные особенности комплекса белка с полиэлектролитом
5.5.1 Ферментативная активность ЛДГ в комплексе с ПСС
5.5.2 Динамика структурных изменений ЛДГ при образовании комплекса с ПСС
5.6 Взаимодействие белков с заряженными коллоидными частицами
5.6.1 Полиэлектролитные микрокапсулы
5.6.2 Фосфолипидные везикулы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

полиэлектролитов. Это в свою очередь изменяет способность к образованию комплексов белков с эндогенными ПЭ, их растворимость и соответственно функциональное состояние ферментов в этих комплексах.
Несмотря на то, что ионы фосфата и сульфата являются основными внутриклеточными анионами, имеется очень мало данных о влиянии их на стабильность белков при различных денатурирующих воздействиях. Кроме того, в литературе отсутствуют данные о том, какая из форм ортофосфата
НР04~ или Н2Р04 7 участвует в стабилизации белков при тепловой денатурации, окислении аминокислотных остатков и особенно при образовании комплексов с полиэлектролитами.
1.1.5 Роль гидрофобных взаимодействий в образовании полизлектролит-белновых комплексов.
Кроме электростатических большой вклад в образование полиэлектролит-белковых комплексов вносят гидрофобные взаимодействия [Tribet С.Р., 2001]. Гидрофобные взаимодействия между белком и ПЭ начинают проявляться на коротких расстояниях между взаимодействующими молекулами, т.е. они эффективны, когда гидрофобные участки белка и ПЭ достаточно близки друг к другу. Лию с соавторами [Jing-jing Liu et al., 2011] показали, что связывание нативного лизоцима с бутил-модифицированными полиаллиламинами зависит от гидрофобности полимера. С увеличением гидрофобных групп полимера происходит два разнонаправленных процесса. С одной стороны возрастает связывание ПЭ с лизоцимом, с другой, увеличивается самоагрегация полимера, которая приводит к диссоциации комплекса его с белком. В результате диссоциации лизоцим полностью восстанавливает свою активность.
Авторы Гао и Дубин полагают [Gao J.Y., Dubin P.L., 1999], что для изучения влияния гидрофобных взаимодействий на константу связывания ПЭ с