Исследование механизмов действия УФ-света на структурно-функциональное состояние и метаболизм лимфоцитов крови человека

• Автор: Земченкова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 175 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,
СИМВОЛОВ И ТЕРМИНОВ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОЦИТАРНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА, ИХ УЧАСТИЕ В МНОГОУРОВНЕВОЙ СИСТЕМЕ ИММУННОЙ ЗАЩИТЫ
1.1. Структурно-функциональные свойства различных популяций лимфоцитов человека
1.2. Характеристика субпопуляций лимфоцитарных клеток
1.2.1. Т-лимфоциты
1.2.2. В-лимфоциты
1.2.3. Натуральные клетки-киллеры
1.3. Регуляция функционирования лимфоцитов цитокинами и факторами роста
1.3.1. Интерлейкин-2 и рецепторный комплекс интерлейкина
1.4. Особенности метаболизма лимфоцитов
1.4.1. Структура и функции лактатдегидрогеназы
1.4.2. Структура и функции цитохром с оксид азы
1.4.3. Структура и функции сукцинатдегидрогеназы
1.4.4. Структура и функции Са2+-АТФазы плазматических мембран
Глава 2. МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ УФ-ИЗЛУЧЕНИЯ НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ
Глава 3. ПУТИ ГИБЕЛИ КЛЕТКИ: СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ
3.1. Апоптоз и некроз
3.2. Структура, физико-химические свойства и функции С095 (Баз/АРО-1) рецептора
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 4. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Объект исследования
4.2. Методы исследования
4.2.1. Выделение лимфоцитов из крови человека
4.2.2. УФ-облучение исследуемых образцов
4.2.3. Получение супернатанта лимфоцитов
4.2.4. Выделение митохондрий лимфоцитов
4.2.5. Определение функциональной активности лактатдегидрогеназы
4.2.6. Определение каталитической активности цитохром с оксидазы
4.2.7. Определение каталитической активности
сукцинатдегидрогеназы
4.2.8. Определение интактности митохондрий
4.2.9. Определение каталитической активности Са2+-АТФазы клеточных мембран
4.2.10. Определение концентрации АТФ в лимфоцитах
4.2.11. Определение интенсивности люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов
4.2.12. Исследование уровня экспрессии некоторых мембранных маркеров на поверхности лимфоцитов методом лазерной проточной цитофлуориметрии
4.2.13. Исследование способов гибели клеток методом лазерной проточной цитофлуориметрии
4.2.14. Условия инкубации лимфоцитов
4.2.15. Статистическая обработка результатов
Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ УФ-СВЕТА НА ФЕНОТИП ЛИМФОЦИТОВ ДОНОРСКОЙ КРОВИ
5.1. Влияние УФ-облучения на уровень ПОЛ мембран лимфоцитов при
различных условиях инкубации
5.2. Исследование влияния УФ-света на уровень экспрессии молекул маркерных рецепторных комплексов Т- и В-лимфоцитов крови человека
5.2.1. Изучение влияния УФ-облучения на уровень экспрессии CD3/ CD 19 маркеров лимфоцитов крови доноров
5.2.2. Влияние УФ-света на уровень экспрессии CD4/ CD8 маркеров Т-лимфоцитов крови человека
5.2.3. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD25 маркера Т-лимфоцитов крови человека
Глава 6. ВЛИЯНИЕ УФ-СВЕТА НА МЕТАБОЛИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ
6.1. Влияние УФ-излучения на активность лактатдегидрогеназы лимфоцитов
6.2. Влияние УФ-света на активность сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов
6.3. Анализ изменения активности цитохром с оксидазы в лимфоцитах при действии УФ-излучения
6.4. Анализ изменения активности Са2+-АТФазы плазматических мембран интактных и УФ-модифицированых лимфоцитов
6.5. Анализ изменения концентрации АТФ в нативных и фотомодифицированных лимфоцитах
6.6. Изменение активности Са2+-АТФазы, ЛДГ, СДГ и ЦО в УФ-облученных лимфоцитах в присутствии ферментов антиоксидантной защиты - супероксиддисмутазы и каталазы
6.7. Изменение активности Са2+-АТФазы, ЛДГ, СДГ и ЦО при инкубации лимфоцитов в присутствии аутологичной плазмы крови Глава 7. АПОПТОЗ ЛИМФОЦИТОВ, ИНДУЦИРОВАННЫЙ УФ-ИЗЛУЧЕНИЕМ
7.1. Изменение уровня экспрессии СВ95-рецепторов лимфоцитов под

нарастание уровня экспрессии ИЛ-2Ра по ходу развития пролиферативного ответа регулируется с рецептора ИЛ-2 через JAK/STAT-путь внутриклеточной сигнализации (E. Zorn et al., 2006; R. Zeiser, R.S. Negin,
2007). Путь JAK/STAT является центральным в передаче сигнала с рецептора ИЛ-2 и, как показывают некоторые исследования, может участвовать в регуляции экспрессии ИЛ-2Ра в нормальных Т-лимфоцитах человека (С. Beadling et al., 1994; V. Imbert et al., 2002; L. Hennighausen, G.W. Robinson,
2008).
Тирозинкиназы семейства Src (в основном Lek и Fyn) имеют первостепенную роль в передаче сигнала с Т-клеточного и Fc-рецепторов в гемопоэтических клетках (Е.А. Palacios, A. Weiss, 2004; Т. Methi et al., 2005; A. Fukushima et al., 2006; R.J. Salmond et al., 2009; J.M. Bradshaw, 2010). Эти киназы находятся в плазматической мембране, преимущественно в липидных слоях, активируются в результате кластеризации рецептора и опосредуют связь между Т-клеточным рецептором и следующими этапами сигнализации, которые запускают кальциевую мобилизацию, экспрессию генов, продукцию цитокинов и клеточную пролиферацию (J.E. Smith-Garvin et al., 2009; J.M. Bradshaw, 2010). Имеются данные о том, что в Т-лимфоцитах Lek56 может обеспечить JAK-независимую сигнализацию с низкоаффинного ßyc-рецептора ИЛ-2 и участвовать в генерации антиапоптотического сигнала (S.G. Rane, Е.Р. Reddy, 2002; Т. Vang et al., 2004).
Предположение о двухкомпонентном характере экспрессии ИЛ-2Ра в Т-лимфоцитах находит подтверждение в схемах регуляции гена ИЛ-2Ра. В гене а-субъединицы выявлено 6 регуляторных зон, причем 5 (PRRI, PRRII, PRRIV, PRRV и PRRVI) участвуют в антиген(митоген)-индуцированной экспрессии ИЛ-2Ра, a 2 (PRRIII и PRRIV) отвечают на ИЛ-2 и связывают транскрипционные факторы STAT5 и Elf-I (Н.Р. Kim et al., 2001; Н.Р. Kim, W.J. Leonard, 2002). Выяснилось, что зона PRRIV имеет еще и места связывания для NFAT. Известно, что транскрипционный фактор NFAT опосредует передачу сигнала с Т-клеточного рецептора и играет ключевую