Хромосомные аберрации, микроядра и апоптоз в лимфоцитах при радиационных воздействиях и других патологических состояниях

• Автор: Колюбаева, Светлана Николаевна
• Шифр специальности: 03.01.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 261 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПОВРЕЖДЕНИЯХ В ГЕНОМЕ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ (обзор литературы)

1.1. Современные методы определения поврежденности генома лимфоцитов

1.1.1. Трансформированный лимфоцит - модель для изучения основных законов клеточного активирования

1.1.2. Повреждения, выявляемые с помощью метода сестринских хроматидных обменов

1.1.3. Метод дифференциально окрашенных хромосом

1.1.4. Флуоресцентная in situ гибридизация

1.2. Исследования повреждений в геноме лимфоцитов с помощью микроядер

1.2.1. Совершенствование метода
1.2.2. Исследование радиационных воздействий с помощью микроядерного анализа
1.2.3. Чувствительность микроядерного теста
1.3. Соотношение диагностической значимости для определения повреждений в геноме лимфоцитов при облучении с помощью анализа микроядер и хромосомных аберраций 34,
1.4. Соотношение между микроядрами и апоптозом
1.4.1. Апоптоз
1.4.2. Клеточный цикл и гибель клетки
1.4.3. Клеточный цикл и апоптоз в дифференцированных клетках
1.4.4. Индукция клеточной гибели, вызванная радиацией
1.4.5. Гены-супрессоры роста опухоли и ответ на радиацию

1.4.6. Апоптотический механизм формирования микроядер
1.5. Нестабильность генома и рак
1.6. Исследование повреждений генома при злокачественных лимфомах
1.6.1. Рекуррентные хромосомные повреждения
1.6.2. Активация генов при лимфомагенезе
1.6.3. Цитогенетические методы в дифференциальной диагностике различных видов лимфом
1.6.4. Прогностическая значимость цитогенетических повреждений при лимфомах
1.6.5. Эволюция опухолевых клонов при гемобластозах
ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЙ И КЛИНИЧЕСКИХ НАБЛЮДЕНИЙ
2.1. Характеристика доноров и обследованных пациентов
2.2. Характеристика использованных животных
2.3. Методы культивирования лимфоцитов периферической крови и получения препаратов для цитогенетического анализа
2.3.1. Построение дозовой зависимости индукции МЯ в облученных in vitro ФГА-стимулированных лимфоцитах периферической крови доноров без использования цитокалазина В
2.3.2. Сопоставление числа клеток с МЯ и ХА на параллельных культурах донорской крови при облучении in vitro
2.3.3. Построение дозовой зависимости индуцированных облучением МЯ в ФГ А-стимулированных лимфоцитах периферической крови с использованием цитокалазина В (двуядерных)
2.3.4. Построение дозовой зависимости числа хромосомных аберраций в облученных in vitro лимфоцитах периферической крови доноров
2.3.5. Построение дозовых зависимостей для индукции клеток с

аномальными ядрами в лимфоцитах периферической крови
2.4. Получение препаратов для анализа апоптотических клеток из крови крыс
2.5. Определение уровня микроядер и хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови у доноров и пациентов
с патологией щитовидной железы
2.6. Приготовление препаратов для электронной микроскопии
2.7. Метод флуорресцентной in situ гибридизации
2.8. Приготовление препаратов для анализа хромосомных аберраций и микроядер у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС и у их детей, а также у пациентов с хроническим вирусным гепатитом В, участников ликвидации химического оружия, пациентов со злокачественными лимфомами
2.9. Идентификация цитогенетических повреждений
2.10. Методы статистической обработки ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование действия облучения на индукцию микроядер
и хромосомных аберраций в ФГ А-стимулированных лимфоцитах периферической крови
3.1.1. Исследование действия облучения на индукцию микроядер в культуре лимфоцитов без цитокалазина В
3.1.2. Исследование действия облучения на индукцию микроядер в культуре лимфоцитов с использованием цитокалазина В
3.1.3. Исследование влияния облучения на индукцию хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови
3.2. Исследование действия радиации на индукцию апоптотических клеток крови человека in vitro и крови крыс in vivo
3.3. Исследование повреждений в геноме лимфоцитов человека и обезьян методом флуоресцентной in situ гибридизации после облучения in vitro и in vivo

использованного излучения [Pecaut et al., 2002, Seidi et al., 2004, Репина, 2006].
Например, исследование образования ХА и МЯ при воздействии си-частицами в лимфоцитах человека были получены линейные зависимости от дозы, при этом уровень МЯ составлял около половины общего числа аберраций и близок к кривой для ДС. Выявленное несоответствие коэффициентов для индукции тотального числа ХА [Bryce et.al., 2007] и для МЯ предполагает трансформацию АФ в МЯ, что не может полностью объяснить формирование последних. При высоких дозах, когда коэффициент ß является определяющим, формирование МЯ происходит путем выделения АФ, тогда этот процесс действителен не более чем на несколько процентов [Hatayoglu, Orta, 2007].
При облучении источником с высокой ЛПЭ, прохождение единичной а-частицы создает высокую вероятность вызвать более чем одно повреждение на клетку. Это можно использовать для объяснения того, что максимальное значение ОБЭ, полученное на соотношении а-коэффициентов для плутония и X-лучей, составляет около 3-х для МЯ, в то время как для ХА оно приближается к 6 [Сальников и соавт., 2007, Gridley et al.,2002].
Похожий механизм образования МЯ при использовании высоких доз облучения предложили [Fenech, 2000], отметив, что при наличии нескольких повреждений в клетке они объединяются, что приводит к меньшему количеству МЯ. Если принять во внимание эту гипотезу, можно ожидать индукцию МЯ в основном большого размера при использовании излучения с высокой ЛПЭ и при высоких дозах редкоионизирующего излучения В то же время, [Nüsse et al., 1992] показали, что различие в размерах анализируемых МЯ не так существенны, поэтому объединение повреждений хромосом не может полностью объяснить снижение уровня МЯ по сравнению с АФ.
[Fenech, 2007] полагает, что с увеличением дозы облучения возрастает вероятность включения АФ в одно из вновь образованных ядер. При этом появляется ряд вопросов — в какой степени зависит вероятность включения