Мутантные копии митохондриальной ДНК в тканях и плазме крови мышей, подвергнутых радиационному воздействию

• Автор: Абдуллаев, Серажутдин Абдуллаевич
• Шифр специальности: 03.01.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Структурно-функциональная характеристика мтДНК.

2. Повреждение мтДНК эндогенными и экзогенными агентами.

3. Репарация повреждений и формирование мутаций мтДНК.

4. Внеклеточная мтДНК-потенциальный маркер

оценки радиационного поражения.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 3

2.1. Животные.
2.2. Радиационная обработка.
2.3. Основные химические реактивы.
2.4. Выделение ДНК фенольным методом.
2.5. Выделение внеклеточной ДНК из плазмы
с использованием магнитных сорбентов.
2.6. Определение содержания ДНК.
2.7. Получение CEL -I эндонуклеазы.
2.8. ПЦР-амплификация участков ДНК.
2.9. Выявление мутаций мтДНК методом гель-электрофореза ДНК при временном градиенте температуры (temporal temperature gradient gel electrophoresis-TTGE).
2.10. Выявление мутаций мтДНК с использованием CEL-I эндонуклеазы.
2.11. Определение количества копий мтДНК методом ПЦР в реальном
времени (ПЦР-РВ).
2.12. Статистическая обработка данных.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Выбор и адаптация чувствительного метода для скрининга радиационно-индуцированных мутаций мтДНК.
3.2. Исследование уровня мутантных копий мтДНК и общего количества копий мтДНК в тканях головного мозга и селезенки облученных мышей.
3.3. Изменения количества внеклеточных мутантных копий и общего содержания копий мтДНК в плазме крови облученных мышей в пострадиационный период.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ.
АТФ - аденозинтрифосфорная кислота;
АФК - активные формы кислорода; в к-ДНК - внеклеточная ДНК
вк-мтДНК - внеклеточная митохондриальная ДНК ИИ - ионизирующее излучение; мтДНК - митохондриальная ДНК;
(ШТР — дезоксинуклеотид трифосфаты ПЦР - полимеразная цепная реакция;
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени цпэ - цепь переноса электронов;
ЭРН - эксцизионная репарация нуклеотидов;
ЭРО - эксцизионная репарация оснований; яДНК - ядерная ДНК;
пациентов при радио-химиотерапии рака легкого показал, что их содержание снижается после достижения существенных результатов терапии [Holdenrieder et al., 2004]. Аналогичные данные получены и при анализе нуклеосом в сыворотке у пациентов с раком поджелудочной железы до, и после проведения радио-химиотерапии [Kremer et al., 2005]. Если режим химиотерапии был эффективен, то значительное количество опухолевых клеток гибнет в течение 24-72 часов, и концентрация опухолеспецифичных вк-ДНК, возрастало в плазме в этот период, а в последующий посттерапевтический период — снижалась. Увеличение содержания общей вк-ДНК наблюдали в плазме пациентов при проведении радиотерапии опухолей [Chan et al., 2008]. А через определенные сроки после завершения радиотерапии с положительными результатами у пациентов наблюдали снижение вк-ДНК [Cheng et al., 2009].
Таким образом, можно утверждать, что уровень общей вк-ДНК существенно отличается у онкологических пациентов! в плазме до, и после радио-химиотерапии.
Учитывая, что мтДНК является более уязвимой мишенью, чем яДНК, для многих повреждающих агентов, согласно выше представленным многочисленным литературным данным,. использование вк-мтДНК в качестве маркера оценки радиационного и генотоксического поражения организма имеет существенные преимущества, относительно яДНК. В процессе радиохимиотерапии опухолей можно ожидать также больше изменений' циркулирующей вк-мтДНК в плазме крови пациентов, как в количественном содержании, так и по частоте мутаций в ней, по сравнению с вк-яДНК.
Поскольку важнейшей задачей нашего исследования являлась изучение изменение уровня мутантных копий мтДНК и уровня общего количества копий мтДНК, относительно яДНК, в тканях облученных мышей в течение пострадиационного периода, требовалось и исследование изменений вк-мтДНК в плазме этих же мышей: