Динамика внутриклеточной концентрации калия в разных фазах развития раннего эмбриона мыши

• Автор: Гольдштейн, Дмитрий Вадимович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 262 с. : ил.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Феноменологическая теория, рассматривающая роль ионного баланса в делении клетки
1.2. Регуляция калиевого баланса клетки в митозе
1.3. Регуляция натриевого баланса клетки в митозе
1.4. Энергетический статус клетки раннего эмбриона млекопитающих
1.5. Принципы электронно-зондового микроанализа (ЕРМА)
1.5.1. Криофиксация элементного состава клетки
1.5.2. Метод freeze-drying
1.5.3. Физико-технические основы ЕРМА
1.5.4. Расчет концентрации элементов на срезе клетки по данным ЕРМА
1.5.5. ЕРМА цитоплазматической концентрации элементов в
одиночной клетке культуры и суспензии
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ И ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Получение ооцитов и ранних эмбрионов мыши
2.1.1. Суперовуляция мыши
2.1.2. Выделение яйцеводов мыши
2.1.3. Вымывание ранних эмбрионов мыши
2.1.4. Получение ооцитов мыши в метафазе II мейоза
2.1.5. Получение зигот мыши в фазах первого клеточного цикла
2.1.6. Получение двухклеточных эмбрионов мыши
2.2. Методы клеточных биотехнологий
2.2.1. Эквилибрация и отмывка эмбриона от криопротектора
2.2.2. Энуклеация зиготы мыши
2.2.3. Получение культуры нейральных стволовых клеток

человека (нейросфер)
2.2.4. Обработка одноклеточного эмбриона мыши цитохалазином Б
2.2.5. Подготовка одноклеточного эмбриона мыши
для конфокальной микроскопии Б-актина
2.3. Технология ЕРМА для раннего эмбриона мыши
2.3.1. Получение полутонких срезов раннего эмбриона мыши
2.3.2. ЕРМА внутриклеточной концентрации элементов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Особенности технологии ЕРМА применительно к раннему эмбриону мыши
3.1.1. Подготовка 2 мкм срезов раннего эмбриона
мыши для ЕРМА
3.1.2. Эмпирический метод определения поправочного коэффициента в уравнении расчета концентрации элементов
3.2. Измерение концентрации элементов в клетках раннего эмбриона мыши
3.2.1. Сравнение групп ооцитов в метафазе II мейоза и зигот
мыши по цитоплазматической концентрации калия и фосфора
3.2.1.1. Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации элементов (К, Р) по группам ооцитов и зигот мыши
3.2.1.2. Обсуждение баланса калия и фосфора в цитоплазме
ооцита мыши
3.2.1.3. Обсуждение баланса калия и фосфора в цитоплазме
зиготы мыши
3.2.2. Определение цитоплазматической концентрации элементов (К, Р) в течение первого клеточного цикла мыши

3.2.2.1. Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации элементов (К, Р) на разных стадиях развития зиготы мыши
Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации
элементов (К, Р) в Орфазе зиготы мыши
Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации
элементов (К, Р) в О^-фазе зиготы мыши
Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации
элементов (К,_Р).в.Б-фазе зиготы мыши
Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации
элементов (К, Р) в вг-фазе зиготы мыши
Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации
элементов (К, Р) в профазе митоза зиготы мыши
Результаты ЕРМА цитоплазматической концентрации элементов (К, Р) в телофазе митоза зиготы мыши
3.2.2.2. Обсуждение результатов ЕРМА цитоплазматической концентрации элементов (К, Р) в течение первого
клеточного цикла мыши
Изменения концентрации цитоплазматического
калия в течение первого клеточного цикла мыши
Пространственное распределение цитоплазматического калия в разных фазах первого
клеточного цикла
Оценка эффективного коэффициента диффузии
калия в О^Б-фазе зиготы мыши
Модель калийобусловленной полимеризации актина
и механизма аккумуляции калия в цитоплазме зиготы мышы
Гипотеза о механизме участия актина в сближении
пронуклеусов в зиготе мыши
3.2.3. Определение концентрации элементов (К, Р, Па)

металлом. Более широкое распространение получила практика замораживания путем погружения всего образца в жидкий криоагент. С этой целью предложено использовать ряд криофиксаторов (Costello, Corless, 1978).
Выбор среды для замораживания осуществляется по критерию минимизации размеров кристаллов льда, которые образуются при низкотемпературной фиксации клетки. Процесс
кристаллизации/рекристаллизации приводит к перераспределению элементов в рамках кристаллических структур льда (Burovina et al., 1978). В силу этого важной характеристикой является не только конечная температура криофиксации, но и скорость охлаждения, от которой зависит размер кристаллов (Dowell, Rinfret, 1960; Läget, 1960; Rasmussen, 1982). Наибольшая скорость замораживания достигается в жидком пропане (85°К), переохлажденном жидким азотом. При этом пропан не затвердевает долгое время, что значительно упрощает манипуляции с ним.
Рассмотрение процесса кристаллообразования показывает, что трудно получить аморфную структуру льда на заметную толщину образца (Eider et al., 1981; Rasmussen, 1982). Замораживание под высоким давлением позволяет получить зону витрифицированного льда глубиной до 500 мкм (Moor et al., 1980). Однако такой способ требует специального оборудования и очень дорог. Обычно глубина