Разработка антигенного эритроцитарного диагностикума для иммунологического мониторинга колибактериоза крупного рогатого скота

• Автор: Каиси, Валерия Игоревна
• Шифр специальности: 16.00.03, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
1 ВВЕДЕНИЕ
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1.Определение колибактериоза, морфологические,
культуральные, биохимические, антигенные свойства E. coli
2.2. Факторы патогенности
2.2.1. Энтеротоксигенные E. coli
2.2.2. Энтеропатогенные E. coli
2.2.3. Энтероинвазивные E. coli
2.2.4. Септические E. coli
2.3. Лабораторная диагностика колибактериоза
2.3.1. Бактериологические методы выделения
и идентификации E. coli
2.3.2. Диагностические тесты, используемые для
диагностики колибактериоза
2.4. Принципы приготовления эритроцитарных
антигенных диагностикумов
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы
3.1.1. Выделение возбудителей острых кишечных заболеваний и оценка их культурально-морфологических
и биохимических свойств
3.1.2. Приготовление эшерихиозного антигенного эритроцитарного диагностикума
3.1.3. Получение гипериммунных сывороток
3.1.4. Получение сывороток КРС
3.1.5. Постановка РИГА микрометодом
3.1.6. Постановка РИГА макрометодом
3.1.7. Постановка реакции агглютинации
4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Клинико-эпизоотологические данные
4.2. Серологическая и биохимическая идентификация E. coli
4.3. Методика приготовления эшерихиозного
антигенного эритроцитарного диагностикума
4.3.1. Подготовка эритроцитарной массы
4.3.2. Подготовка гемосенситинов
4.3.3. Сенсибилизация эритроцитов
4.4. Контроль качества эритроцитарных диагностикумов
4.4.1. Прозрачность и цветность
4.4.2. Контроль на спонтанную агглютинацию
4.4.3. Специфичность и активность
4.5. Результаты экспериментальных испытаний эритроцитарного диагностикума в РНГА на
материале от вакцинированных животных
4.6. Результаты изучения чувствительности
РИГА и РА
4.6.1.Результаты сравнительного изучения РНГ А
макро- и микрометодом
4.6.2. Результаты сравнительного изучения РИГА
макрометодом и РА
5 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
6 ВЫВОДЫ
7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
9 ПРИЛОЖЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. В последнее время многие исследователи установили, что заболевания желудочно-кишечного тракта новорожденных телят по частоте, массовости и величине причиняемого экономического ущерба занимают важное место (Сидоров М.А., 1987; Горбов Ю.К. с соавт. 1989; Федоров Ю.Н., 1996 и др.).
Доказано, что острые кишечные заболевания телят в первые дни жизни вызываются преимущественно условно-патогенной микрофлорой (Девришов Д.А. с соавт, 1991, 1998, 1999; Ставцева Л .Я. с соавт., 1989, 1991 и др.). Поэтому в последнее время большое внимание уделяется изучению условно-патогенных бактерий как этиологическому фактору в возникновении диареи новорожденных телят.
К особенно распространенным заболеваниям, сдерживающим развитие животноводства, относится колибактериоз, которым болеет в основном молодняк сельскохозяйственных животных.
Колибактериоз регистрируют во всех странах мира. Он наносит огромный экономический ущерб животноводству. Поэтому до настоящего времени актуальной остается проблема создания методов надежной профилактики и экспресс-диагностики колибактериоза
сельскохозяйственных животных.
В системе мер профилактики и искоренения болезней животных и человека важное значение отводится ускоренной и точной диагностике. От правильного и своевременно поставленного диагноза зависит успех лечения и ликвидации возникшего заболевания.
Диагностика в инфекционной патологии животных находится в центре повседневной деятельности ветеринарных специалистов и является самым трудоёмким разделом ветеринарии.

обычно реагирующие с гетерологичными антигенами и обусловливающие перекрестные реакции.
Основные достоинства РКоА: высокая экономичность (в 50-250 раз дешевле других иммунологических методов); высокая чувствительность; простота постановки реакции (не требуется дорогого оборудования для приготовления реагентов и учета результатов).
Для проведения РКоА необходимо: получение активной и
стабильной по содержанию белка взвеси золотистого стафилококка; строгое соблюдение требований при получении иммунной сыворотки используемой для сенсибилизации стафилококка, а также при проведении процесса сенсибилизации; правильная постановка реакции: учет ее результатов (Ф. С. Носков, 1985).
Для тестирования с коагглютинирующими реагентами культуры Е. coli выращивают на среде Минка при температуре 35 °С в течение 18 ч и затем готовят суспензию бактерий на ФСБ.
РКоА обычно ставят на стеклянных пластинках, смешивая равные объемы (1-2 капли) исследуемого материала (агаровая суспензия E. coli) и стафилококкового диагностикума. Смесь тщательно перемешивают покачиванием стеклянной пластинки и через 15 с учитывают результаты (ЗарозаВ.Г., 1991).
Разработаны оптимальные условия для получения активных коагглютинирующих диагностикумов для ускоренной индикации эшерихий с адгезивными антигенами К88 и К99 с помощью РКоА и установлена пригодность этой реакции для обнаружения эшерихий в различных материалах (Пехов А.П., 1985; Леонтьева И.А., 1990; Кравчук Л.С. с соавт., 1992)
Реакция диффузионной преципитации (РДП). РДП позволяет определять специфические антитела в сыворотках крови больных