Ранние эффекты цитокининов в модельной системе проростков амаранта

• Автор: Гетман, Ирина Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил

Оглавление
Список специальных сокращений
Введение
Литературный обзор
I. Цитокинины
1.1. Распространение и содержание цитокининов в растениях
1.2. Биологическая активность
1.3. Основы метаболизма
1.4. Методы идентификации цитокининов
1.5. Амарантовый биотест
1.6. Рецепция цитокининов
1.7. Гены первичного ответа
И. Механизмы внутриклеточной трансдукции сигналов
II. 1. Протеинкиназы и протеинфосфотазы
ІІ.2. Кальциевая сигнальная система
И.З. G-белки
П.4.Фосфолипазы
ІІ.5. Комплексный характер сигнальной трансдукции
Материалы и методы исследований
1. Реактивы
2. Выращивание растений амаранта и получения семян

3. Стандартный тест для определения
цитокининовой активности
4. Модифицированный экспресс микротест
5. Проведение ингибиторного анализа
6. Постановка ингибиторно-кинетических опытов
7. Сравнения действия цитокинина и света
8. Оценка жизнеспособности проростков
9. Цитологический анализ с помощью
световой микроскопии
10. Ультраструктурный анализ с
помощью электронной микроскопии
11. Экстракция и анализ эндогенных цитокининов
12. Изучение активности фосфолипазы Д in vivo
13. Статистическая обработка данных
Результаты и обсуждение
I. Особенности экспериментальной модели
1.1. Дозовая зависимость
1.2. Кинетика действия
1.3. Специфичность
1.4. Объем тестируемого образца
1.5. Тканевая и клеточная специфичность ответа на цитокинин
1.6. Модифицированный биотест и его преимущества
II. Модифицированный амарантовый биотест как экспериментальная модель исследования ранних эффектов цитокининов
II. 1. Действие ингибиторов транскрипции и трансляции

11.2. Определение жизнеспособности клеток после
воздействия антибиотиков
11.3. Кинетический анализ действия ингибиторов
транскрипции и трансляции
11.4. Проверка адекватности кинетического анализа
11.5. Ультраструктурные исследования
III. Влияние различных ингибиторов на эффект цитокининов
III. 1. Ингибиторы синтеза фосфатидных кислот фосфолипазой Д
Ш.2. Ингибиторы протеинкиназ и (протеин)фосфатаз
ГО.З. Антагонисты/ингибиторы кальциевого обмена
Ш.4. Влияние некоторых других соединений]
Ш.5. Основные итоги кинетико- ингибиторного анализа
IV. Анализ действия мастопарана
V. Сопоставление действия цитокинина и света
V.l. Анализ действия 1,10-фенантролина
V.2. Анализ действия 1-бутанола
V.3. Анализ действия 3,3’,4’-5-тетрахлоросалициланилида (SACU)
VI. Выявление активности фосфолипазы Д и реакции
трансфатидилирования in vivo
Заключение
Выводы
Список цитируемой литературы

II. 5. Комплексный характер сигнальной трансдукции
Растения, в отличие от животных, обладают значительно меньшим количеством гормонов (примерно на порядок). Поэтому ранее было предположено (Романов, 1989), что в качестве компенсации этой “гормональной недостаточности” растения могут обладать большим количеством разнообразных рецепторов к каждому классу фитогормонов. Действительно, последующие открытия рецепторов фитогормонов и путей трансдукции гормональных сигналов подтвердили эти предположения. У растений установлена множественность рецепторов для многих фитогормонов. Так, у арабидопсиса в качестве рецепторов этилена выступают 5 разных белков, а рецепторов цитокининов - три (Hwang et al., 2002). Правда, все вышеуказанные рецепторы принадлежат к одному общему типу сенсорных гистидин-киназ. Однако детальное исследование сигнальной трансдукции ауксинов и абсцизовой кислоты привело к заключению, что по крайней мере для этих фитогормонов должны существовать рецепторы с разной внутриклеточной локализацией: мембранные и ядерные. Имеются указания, что и для цитокининов, помимо мембранных, могут существовать внутриклеточные рецепторы (Kulaeva et al., 1996). Поэтому представляется весьма вероятным, что для многих фитогормонов имеются разветвленные или параллельные пути трансдукции сигнала. Такая организация сигнальной трансдукции повышает надежность передачи сигнала и дает возможность направлять его на различные внутриклеточные мишени в зависимости от специализации клетки и ее состояния. В целом множественность путей сигнальной трансдукции и взаимодействие между ними образуют в клетке так называемую “сигнальную сеть”, которая в настоящий момент является объектом детального исследования как на растениях, так и на других организмов.