Иммунобиологическая характеристика вакцинных и вирулентных штаммов вирусов оспы овец и оспы коз

• Автор: Кукушкина, Мария Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 157 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВКПДО - вирус контагиозного пустулезного дерматита овец
ВНА - вируснейтрализующие антитела
ВНД - вирус нодулярного дерматита
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА - иммунофсрментный анализ
КРС - крупный рогатый скот
МАТ - моноклональные антитела
MPC - мелкий рогатый скот
НД - модулярный дерматит
нм - нанометр
н.п. - нуклеотидная пара
НРИФ - непрямая ракция иммунофлюоресценции
ОФД - ортофенилендиамин
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РГА - реакция гемагглютинации
РДСК - реакция длительного связывания комплемента
PH - реакция нейтрализации
РНГА - реакция непрямой гемагглютинации
РНК - рибонуклеиновая кислота
ТЦД50 - 50%-ная тканевая цигопатическая доза
ФБР - фосфатно-буферный раствор
ЦПД - цитопатическое действие
ВНК-21 - перевиваемая культура клеток почки сирийского хомячка
ELISA - иммуноферментный анализ
КГ-91 (CG-91) - перевиваемая культура клеток гонад козы
MA-104 - перевиваемая культура клеток почки зеленой мартышки
Маге-145 - клоновый вариант клеточной линии MA

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Историческая справка
2.2. Характеристика вирусов оспы овец и коз
2.2.1. Морфология
2.2.2. Устойчивость возбудителя к факторам внешней среды
2.2.3. Организация генома, структура основных белков и репликация вируса
2.3. Эпизоотические особенности оспы овец и оспы коз
2.4. Культивирование вирусов оспы овец и оспы коз
2.5. Средства и методы диагностики оспы овец и коз
2.5.1. Электронная микроскопия
2.5.2. Серологические методы диагностики
2.5.3. Иммуноферментный метод диагностики
2.5.4. Биологическая проба
2.5.5. Молекулярные методы диагностики оспы овец и оспы коз
2.5.6. Методы дифференциальной диагностики оспы овец и оспы коз
2.6. Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ
3.1.1. Материалы для анализа эпизоотической ситуации по оспе овец и оспы
коз в различных странах мира и Российской Федерации
3.1.2. Вирусы
3.1.3. Животные
3.1.4. Культуры клеток
3.1.5. Оборудование и инструменты
3.1.6. Питательные среды
3.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.2.1. Получение первичной культуры клеток почки овцы
3.2.2. Культивирование вирусов оспы овец и оспы коз

3.2.3. Определение инфекционной активности вирусов оспы овец и коз
3.2.4. Изучение клинических признаков оспы при экспериментальном заражении овец и коз
3.2.5. Получение антигена для серологических исследований
3.2.6. Получение гипериммунных сывороток для серологических и вирусологических исследований
3.2.7. Статистическая обработка результатов
3.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.3.1. Анализ эпизоотической ситуации по оспе овец и коз в мире и Российской Федерации
3.3.2. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вирусов
оспы овец и оспы коз
3.3.2.1. Изучение иммунобиологических свойств полевых изолятов вирусов
оспы овец и оспы коз
3.3.2.2. Иммунобиологические характеристики штаммов «Афганский» и «ВНИИЗЖ» вируса оспы овец
3.3.2.3. Сравнительное изучение иммунобиологических характеристик штаммов «Реііог», «Приморский 2003» и «ВНИИЗЖ 2003» вируса оспы коз
3.3.2.4. Изучение чувствительности различных вариантов культуры клеток
гонад козы к вирусам оспы овец и оспы коз
3.3.2.5. Разработка оптимальных условий культивирования вирусов
оспы овец и оспы коз
3.3.2.6. Патогенность и антигенная активность вирусов оспы овец и коз
при перекрестном заражении овец и коз
3.3.2.7. Получение антигенов и гипериммунных сывороток к вирусам
оспы овец и оспы коз
3.3.2.8. Изучение степени родства между вирусами оспы овец и коз
с использованием серологических методов
3.3.3. Изучение специфической активности вирусов оспы овец и оспы
коз при длительном хранении
3.3.4. Определение иммуногенной активности вирусвакцин против

жительных случаях на месте инъекции развивается местный оспенный процесс (розеола, папула, везикула, пустула, некроз), специфичность которого подтверждают методом вирусоскопии мазков, приготовленных из срезанного эпителия розеолы, на присутствие элементарных частиц [12,27,28,29,59].
2.5.5. Молекулярные методы диагностики оспы овец и коз
Для диагностики оспы овец рутинно используются несколько широко распространенных методов основанных на вирусологических и серологических методах. Большинство из них являются трудоемкими, длительными по времени и большинство из них имеют низкую специфичность, в связи с тем, что происходит перекрестная реакция с вирусом контагиозного пустулезного дерматита овец (ВКПДО). ВОО И ВКГ1ДО являются схожими болезнями овец и коз и их трудно дифференцировать друг от друга [12,27,28,29,59,83]. Большинство серодиагностических методов такие как РИД, РСК, ИФА, которые направлены на обнаружение антител включая перекрестную реакцию, непригодны для дифференциации ВОО от ВКПДО [83,160].
В связи с этим применение метода ПЦР для обнаружения вирусов оспы овец и оспы коз является перспективным направлением в диагностике этих заболеваний.
В литературе имеются данные о методе ПЦР основанном на белках слияния и прикрепления, для обнаружения вирусов рода capripox в биопсийных материалах и культуре клеток.
Mangana-Vougiouka О. и соавторы [159] разработали простой, быстрый и специфический метод ПЦР для диагностики оспы овец. Они использовали праймеры KS-1 и InS-1 из генома вируса оспы овец. Для исследования ими были использованы шесть различных изолятов вируса оспы овец, 2 изолята вируса контагиозного пустулезного дерматита и 3 изолята герпесвирусов животных в качестве контроля. Чувствительность разработанной ПЦР оказалась достаточно высокой, с помощью двух систем праймеров были фланкированы соответствующие участки во всех изолятах оспы овец. Все отрицательные контроли являлись отрицательными в реакции.