Аутоантитела к фактору роста нервов при нарушениях развития нервной системы : В эксперименте и клинике

• Автор: Краснолобова, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. ФРН и его роль в развитии и функционировании нервной системы
2. Антигенные особенности мозга и механизмы запуска
аутоиммунных реакций
3. Психический дизонтогенез и его проявления у детей
раннего возраста
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Материалы
1.1. Экспериментальные животные
1.2. Группы пациентов
1.3. Приготовление образцов сыворотки крови
2. Методы
2.1. Выделение и очистка ФРН из спермы быка
2.2. Определение концентрации белка
2.3. БЭБ-электрофорез в полиакриаламидном геле
2.4. Денситометрирование полиакриламидных гелей
2.5. Иммунизация животных
2.6. Определение уровня ААТ к ФРН и СА в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа
2.7. Поведенческие эксперименты
2.7.1. Тест “Открытое поле”
2.7.2. Тест “Приподнятый крестообразный лабиринт”
2.7.3. Тест на способность к сохранению и удержанию информации
2.7.4. Тест “Горячая пластина”
2.8. Статистическая обработка результатов

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Выделение ФРН
1.1. Выделение и очистка ФРН из спермы быка
1.2. БЭБ-электрофорез в полиакриламидном геле
2. Экспериментально-биологическое исследование
2.1. АТ к ФРН и СА в крови иммунизированных самок мышей
и их потомства
2.2. Влияние АТ к ФРН и СА на общее физическое развитие
молодых животных
2.3. Влияние АТ к ФРН и СА на двигательную активность
и уровень эмоциональности молодых животных
2.4. Влияние АТ к ФРН и СА на процесс обучения
молодых животных
2.5. Влияние АТ к ФРН и С А на порог болевой чувствительности молодых животных
3. Клинико-биологическое исследование
3.1. ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых детей в первые месяцы и годы жизни
3.2. ААТ к ФРН в сыворотке крови детей с психическим дизонтогенезом экзогенной природы
3.2.1. ААТ к ФРН в крови детей с психическим дизонтогенезом экзогенной природы (первое обследование)
3.2.2. ААТ к ФРН в крови детей с психическим дизонтогенезом экзогенной природы (повторное обследование)
3.2.3. ААТ к ФРН в сыворотки крови матерей обследованных детей
с психическим дизонтогенезом экзогенной природы
3.3. ААТ к ФРН в сыворотке крови детей с психическим дизонтогенезом эндогенной природы
3.3.1. ААТ к ФРН в крови детей с психическим дизонтогенезом
эндогенной природы (первое обследование)

3.3.2. ААТ к ФРН в крови детей с психическим дизонтогенезом эндогенной природы (повторное обследование)
3.3.3. ААТ к ФРН в сыворотки крови матерей обследованных
детей с психическим дизонтогенезом эндогенной природы
3.4. ААТ к ФРН в сыворотке крови детей с психическим
дизонтогенезом депривационной природы
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

замораживали в жидком азоте и лиофилизировали. Лиофилизированный препарат, обогащенный субъединичным комплексом ФРН, хранили при -70°С в атмосфере азота, гелия или аргона.
4. 1-1.5 г лиофилизированного препарата, интенсивно взбалтывая, растворяли в 10 мл охлажденного до +4°С 0.1 М нитратного буфера (pH 3.0), а затем центрифугировали при 14000 об/мин в течение 5 минут.
5. Полученный супернатант наносили на колонку SP-sephadex С-50 (“Sigma”, США) (60x1.5 см), уравновешенную 0.1 М нитратным буфером (pH
3.0), содержащим 0.4 М NaCl. Колонку промывали со скоростью 60 мл/час последовательно следующими буферными растворами: 1.5 л 0.1 М нитратного буфера (pH 3.0), содержащего 0.4 М NaCl, 1 л 0.1 М нитратного буфера (pH
3.0), не содержащего NaCl, 1.5 л 0.05 М Трис-HCl буфера (pH 9.0).
6. Белок элюировали в линейном градиенте от 0 до 0.5 М NaCl в 0.05 М Трис- НС1 буфере (pH 9.0). Собирали 2-ой и 3-й пики белка (P-комплекс из двух субъединиц и одна мономолекулярная Р-субъединица соответственно).
7.Полученные препараты ФРН концентрировали на проточной мембране Vivaflow-50 Flipflow (“Sigma”, США) (MWCO 10000 Da) до концентрации не менее 1 мг/мл, замораживали и хранили при -70 °С.
2.2. Определение концентрации белка.
Концентрацию выделенного ФРН определяли методом Лоури (Lowry O.N., et al., 1951). Для проведения количественной оценки была построена калибровочная кривая с использованием в качестве стандарта коммерческого препарата лиофилизированного бычьего сывороточного альбумина (“Sigma”, США).
2.3. SDS-электрофорез в полиакриламидном геле.
Для анализа степени чистоты препарата ФРН использовали метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия по Леммли (Laemmli U.K., et al., 1970). Электрофорез проводили в 15% полиакриламидном геле толщиной 0.75 мм, содержащем 0.2М додецилсульфата