Влияние мутантных аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1 человека на ВИЧ-инфекцию

• Автор: Рябов, Григорий Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Вирус иммунодефицита человека первого типа
1.1. Строение вириона ВИЧ-
1.2. Вирусные белки и их роль в жизненном цикле ВИЧ-
1.3. Деление вируса на подтипы
1.4. Эпидемия ВИЧ-1-инфекции в России
Глава 2. Хемокиновые рецепторы как корецепторы проникновения
ВИЧ в клетку
2.1. Взаимодействие ВИЧ-1 с клеткой
2.2. Хемокиновая система регуляции
2.2.1 Классификация хемокинов
2.2.2. Роль хемокинов в организме человека
2.2.3. Хемокиновые рецепторы используемые ВИЧ-
2.3. Хемокиновый рецептор ССЯ
2.3.1. Организация гена хемокинового рецептора ССЯ
2.3.2. Структура хемокинового рецептора ССІ
2.3.3. Возможные варианты использования хемокинового
рецептора ССЯ5 в терапии ВИЧ-инфекции
Глава 3. Мутации генов хемокиновой системы регуляции,
оказывающие влияние на ВИЧ-инфекцию
3.1. Мутации в гене хемокинового рецептора ССЯ5,
оказывающие влияние на ВИЧ-инфекцию
3.1.1. Делеция в открытой рамке считывания гена
хемокинового рецептора ССЯ
3.1.2. Другие мутации гена хемокинового рецептора ССЯ
и его лигандов
3.2. Мутации других генов хемокиновой системы регуляции,
оказывающие влияние на ВИЧ-инфекцию
3.3. Гаплотипы гена хемокинового рецептора ССЯ
3.4. Описание групп, исследовавшихся при изучении роли мутаций
влияющих на вероятность заражения и развитие ВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. Материалы и методы
1.1. Метод получения «грубых» лизатов мононуклеарных клеток периферической крови
1.2. Метод детекции мутантного аллеля гена CCR-
1.3. Метод детекции мутантного аллеля гена CCR-
1.4. Метод детекции мутантного аллеля гена SDF
1.5. Метод детекции полиморфизма CCR5-59029A/G,
располагающегося в промоторной области гена CCR
1.6. Электрофоретический анализ препаратов ДИК
1.7. Серологический метод определения подтипов вируса
иммунодефицита человека первого типа
1.8. Использование метода сравнительной электрофоретической
подвижности гетеродуплексов для определения подтипа вируса
1.9. Амплификация нуклеотидных последовательностей
области р24 гена gag
1.10. Определение и анализ нуклеотидной последовательности
фрагментов ДНК
1.11. Статистическая обработка данных
1.12. Сбор эпидемиологических данных
1.13. Формирование группы «контактных» наркоманов
Глава 2. Изучение вспышки ВИЧ-инфекции в гЛысьва
Пермской области
2.1. Необходимая информация о г. Лысьва
2.2. Эпидемиологическая характеристика вспышки ВИЧ-инфекции в г. Лысьва, среди лиц практикующих внутривенное введение
психоактивных препаратов
2.3. Особенности употребления психоактивных препаратов в г.Лысьва
2.4. Обнаружение и характеристика группы «контактных» наркоманов -наркоманов, неоднократно подвергавшихся риску заражения ВИЧ-1 парентеральным путем, но оставшихся серонегативными
2.5. Формирование двух контрольных групп: группы
ВИЧ-инфицированных и группы здоровых доноров
Глава 3. Характеристика вируса, вызвавшего эпидемию в гЛысьва
3.1. Анализ сывороток, полученных от ВИЧ-инфицированных

наркоманов г.Лысьва, методом иммуноферментного анализа
3.2. Генотипирование образцов ДНК, полученных от ВИЧ-инфицированных наркоманов г.Лысьва, методом сравнительной
оценки электрофоретической подвижности гетеродуплексов для генов env и gag
3.3. Анализ первичной структуры областей гена gag, кодирующих
участок белка р24, вариантов ВИЧ-1, выделенных в г.Лысьва
Глава 4. Изучение распространения мутантных аллелей генов
CCR2, CCR5 и SDF1 среди группы здоровых доноров
Глава 5. Изучение распространения мутантных аллелей генов
CCR2, CCR5 и SDF1 среди ВИЧ-инфицированных наркоманов
и группы «контактных»
5.1. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2,
CCR5 и SDF1 среди ВИЧ-инфицированных наркоманов
5.2. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2,
CCR5 и SDF1 в группе «контактных»
5.2.1. Выделение двух подгрупп в группе «контактных» наркоманов
5.2.2. Изучение распространения мутантных аллелей генов CCR2,
CCR5 и SDF1 среди группы «контактных» наркоманов
и двух выделенных подгрупп
5.3. Сравнение распределений мутантных аллелей генов CCR2,
CCR5 и SDF1 в группах ВИЧ-инфицированных,
здоровых доноров и «контактных» наркоманов
ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

вируса (Mas et al., 1999).
Таким образом, можно утверждать, что устойчивость к заражению ВИЧ связана только с отсутствием белка CCR5 на поверхности клеток-мишеней (генотип CCR5A32 в гомозиготном состоянии). Однако, необходимо отметить, что в литературе присутствуют сообщения о единичных случаях инфицирования людей, гомозиготных по этой делеции Balotta et al., 1997; O'Brien et al., 1997).
В отличие от гомозиготносте, гетерозиготность по делеции CCR5, по-видимому, не повышает резистентность организма человека к инфекции ВИЧ, хотя in vitro скорость размножения большинства вариантов вируса в таких клетках существенно снижена из-за падения концентрации CCR5 на поверхности чувствительных клеток (Benkirane et al., 1997). Также причиной уменьшения количества рецептора CCR5 на поверхности клеток может быть транс-негативный эффект, состоящий в димеризации нормального и дефектного CCR5 белка, что существенно затрудняет транспорт нормального рецептора к клеточной мембране (Chelli et al., 2001). По-видимому, это обстоятельство и является причиной влияния гетерозиготного генотипа на течение инфекционного процесса in vivo, увеличивая среднюю продолжительность бессимптомного периода заболевания на несколько лет (Dean et al., 1996).
В процессе исследований была определена частота встречаемости мутации CCR5A32. Так, в первых работах, посвященных роли мутации CCR5A32, ее частота среди лиц европеоидной расы была определена как 0,092-0,11. В то же время, было показано, что делеция практически не встречается у лиц других рас. Соответствующая частота для афроамериканцев составила 0,017 (Dean et al., 1996; Samson al., 1996; Paxton et al., 1996). Однако дальнейшие исследования обнаружили существование градиента частот встречаемости аллеля CCR5A32 даже в Европе: наибольшая частота наблюдается на севере, у народов финно-угорской группы (Pastinen et al., 1998), наименьшая - у народов, живущих на побережье Средиземного моря. Эти данные были подтверждены глобальным исследованием распространения мутации CCR5A32 по всему миру (Martinson et al., 1997). Анализ других мутаций, расположенных на хромосоме 3 по соседству с CCR5A32, показывает, что делеция единожды возникла у человека несколько тысяч лет тому назад где-то на северо-востоке Европы (Libert et al., 1998).
Среди народов нашей страны делеционный аллель с наиболее высокой частотой встречается, как и следовало ожидать, у представителей финно-угорской группы (Казеннова с соавт.,1998; Yudin et al., 1998). У тюркоязычных народов