Хромато-масс-спектрометрический анализ изменений фосфолипидов в плазме крови и мозге при действии ингибиторов холинэстеразы и глутаматергической системы

• Автор: Каратассо, Юрий Олегович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Роль масс-спектрометрии в современных биологических исследованиях
1.2 Методы ионизации
1.2.1 Электронный удар (ЭУ)
1.2.2 Бомбардировка быстрыми атомами (ББА)
1.2.3 Химическая ионизация (ХИ)
1.2.4 Ионизация электрораспылением (ИЭР)
1.3 Теории, описывающие ИЭР
1.4 Механизмы образования ионов при ИЭР
1.5 Метод регистрации ионов: ионная ловушка
1.6 Тандемная масс-спектрометрия
1.7 Исследование фосфолипидов методами масс-спектрометрии
1.7.1 Анализ фосфатидилхолинов (ФХ)
1.7.2 Анализ фосфатидилэтаноламинов (ФЭА)
1.7.3 Анализ сфинголигхидов
1.7.4 Анализ фосфатидилинозитов (ФТИ)
1.8 Заключение
Глава 2. Материалы и методы
2.1 Реактивы
2.2 Биохимические методы
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1 Исследования простагландинов и полиненасыщенных жирных кислот
методом МС/ИЭР с прямым вводом
3.1.1 Количественные исследования в модельных растворах
3.1.2 Исследование зависимости интенсивности сигнала в масс-спектре 74 от структуры молекулы полиненасыщенной жирной кислоты

3.1.3 Зависимость интенсивности сигнала в масс-спектре от добавления триэтиламина (ТЭА) в различной концентрации, а также от
состава растворителей
3.1.4 Кинетика деградации простагландина Е2 в присутствии БСА
3.2 Количественный анализ антиаритмических препаратов нибентана и ОФ-7976 в плазме крови
3.3 Исследование молекулярных видов липидов методом хромато-масс-спектрометрии
3.3.1 Исследование фосфолипидов плазмы крови пациентов с болезнью Альцгеймера (БА) при лечении ривастигмином и мемантином
3.3.1.1 Болезнь Альцгеймера
3.3.1.2 Влияние ривастигмина и мемантина на фосфолипидный спектр плазмы крови
3.3.2 Исследование липидов гиппокампа, коры и мозжечка мышей при введении фактора некроза опухоли альфа (ФИО-а) и димебона
3.3.2.1 Биохимические свойства и функции ФНО-а
3.3.2.2 Влияние ФНО-а и нейропротектора димебона на
липидный спектр головного мозга мышей
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
(З А - бета-амилоидный пептид
АХЭ - ацетилхолинэстераза
БА - болезнь Альцгеймера
ББА — бомбардировка быстрыми атомами
БСА - бычий сывороточный альбумин
БуХЭ — бутирилхолинэстераза
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография дис — диссоциация, индуцированная столкновением ИЛ - интерлейкин
ИЭР - ионизация электрораспылением ЛФХ - лизофосфатидилхолины МС — масс-спектрометрия
ПРА - предшественник бета-амилоидного пептида ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты СМ - сфингомиелины ТЭА - триэтиламин
ФНО-а - фактор некроза опухоли альфа
ФТИ - фосфатидилинозиты
ФХ - фосфатидилхолины
ФЭА - фосфатидилэтаноламины
ХИ - химическая ионизация
цнс - центральная нервная система
ЭУ - электронный удар
15-А-РС12- 15-деокси- Д12,14-простагландин ,Т2
АА — арахидоновая кислота
АСХ - ацетонитрил
1)НА — докозагексаеновая кислота
ЕРА — эйкозапентаеновая кислота

поверхности мембраны на внешнюю, что приводит к тому, что клетки начинают распознаваться макрофагами и подвергаются фагоцитозу (Fadok et al., 2001). Кроме того, изменения в фосфолипидном составе описаны для различных заболеваний; например, при болезни Альцгеймера уменьшается количество плазмалогенов в сером веществе мозга (Han et al. 2001), у пациентов с синдромом Барта уменьшается количество кардиолипинов в эритроцитах (Valianpour et al., 2002). Также в последнее время большое внимание уделяется так называемым липидным рафтам: агрегатам из сфинголипидов, фосфолипидов и холестерина. Предполагается, что липидные рафты появляются в мембране для создания участка с другим липидным составом, отличным от состава окружающей мембраны. Предполагается, что эти рафты содержат многие белки, участвующие в клеточной сигнализации (Pike, 2003). И, наконец, эндогенное и экзогенное окисление фосфолипидов также приводит к образованию биологически активных молекул (Marathe et al., 1999, Subbanagounder et al., 2000, Watson at al, 1999, Murphy, 2001). Таким образом, детальный анализ липидного состава начинает играть все более важную роль в клеточной биохимии, поскольку эта информация крайне важна для понимания процессов клеточного метаболизма, передачи сигналов и транспорта веществ через мембрану.
Некоторые исследователи считают, что анализ фосфолипидов является довольно трудной задачей, поскольку, в отличие от белков, липиды редко проявляют специфичное связывание, вследствие чего методики, разработанные для анализа белков и ДНК нельзя применить к исследованию состава фосфолипидов. Кроме того, возникают проблемы связанные с уменьшением загрязнения проб при проведении