Свойства фосфолипаз А2 митохондрий печени крысы

• Автор: Зен Те Ха, 0
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Ташкент
• Количество страниц: 134 c. : ил

В ВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1.Внутриклеточные фосфолипазы
1.2.Фосфолипаза А2 митохондрий
ГЛАВА 2. ЭКСШРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1.Материал ы
2.2.Выделение и фрагментация митохондрий
2.3.Определение активности фосфолипазы А2»
2.4.Определение активностей маркерных
ферментов
2.5.Синтез доликефамида - сорбента для иммо- 53 билизации фосфолипазы
2.6.Иммобилизация фосфолипазы А2 митохондрий
на биоспецифическом сорбенте
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
,3.1.Локализация фосфолипазы в митохондриях
3.2.Свойства мембраносвязадных форм фосфолипазы А2 внутренней и наружной мембран митохондрий
3.3.Каталитические свойства адсорбционно иммобилизованной фосфолипазы А2 митохондрии
3.4.Влияние циклического АМФ и АТФ на эндогенные фосфолипазы митохондрий
3 А К Л Ю Ч Е Н И Е
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Исследование каталитических свойств мембраносвязанных ферментов является одной из наиболее актуальных задач современного мембранного катализа. Особый интерес представляет изучение митохондриальной фосфолипазы ^2» играющей ключевую роль в функционировании биологических мембран, в процессах регуляции их фосфоли-пидного состава и активности липидзависимых ферментов митохондрий. В настоящее время неоспоримо доказано, что митохондриальная фосфолипаза принимает непосредственное участие в развитии "скрытых" поврездений мембран при патологических и стрессорных состояниях, а также в адаптационных процессах организма.
В то же время в изучении каталитических и функциональных свойств этого фермента имеется еще целый ряд проблем, которые к настоящему времени полностью не изучены или же содержат много противоречий. Известно, что в митохондриях фосфолипаза находится только в мембраносвязанном состоянии, однако до сих пор нет однозначного мнения о локализации его в мембранах митохондрий.Све-дения относительно каталитических свойств этого фермента малочисленны и носят разрозненный характер, фактически отсутствуют данные по изучению каталитических свойств фермента в модельных системах и, в частности, в иммобилизованном состоянии
В этой связи целью настоящего исследования было: I) изучить локализацию фосфолипазы А2 в митохондриях; 2) исследовать каталитические свойства мембраносвязанной митохондриальной фосфолипазы А2; 3) разработать метод адсорбционной иммобилизации на нерастворимых фосфолипидах и изучить свойства фермента в иммобилизованном состоянии; 4) изучить влияние циклического АМФ и АТФ на проявлеяие каталитических свойств митохондриальной фосфолипазы
На основании проведенных исследований с использованием маркерных ферментов получены новые данные о локализации фосфолипазы как на внутренней, так и на наружной мембранах митохондрий, в сравнительном аспекте изучены каталитические свойства фермента обеих мембран митохондрий, исследованы свойства митохондриальной фосфолипазы А2, иммобилизованной на субстрате -фосфатидэтаноламине, изучено влияние АМФ и АТФ на проявление гидролитических свойств фермента в мембраносвязанном состоянии. Полученные данные представляют интерес для специалистов,работающих в области биофизики и биохимии по выяснению механизмов участия фосфолипазы А£ в регуляции функционального состояния митохондрий. Результаты работы могут быть использованы в медицине для разработок методов диагностики различных патологических процессов, связанных с нарушением функционирования митохондрий.

ГОМОГЕНАТ ПЕЧЕНИ
ЦЛР,6000},

ЦЛР,6000|, І 15 мин

15 мин

Митохондрии
Ядерная фракция, эритроциты, неразрушенные клетки
Микросомы,
ЛИ.30С0МЫ И др. I
трехкратное промывание осмотический шок (набухание: 2 мМ трис-НС1~бусЬер,рН 7,4, 20 мин сокращение: + 1/3 объема 40%-ной сахарозы)
ЦБР,I6000£,
40 мин
Наружная мембрана + межмембранные белки
105000£, |б0 мин
Межмембран- Наружная ные белки мембрана (на анализ) (на анализ)

"Тени митохондрий
3-хкратное замораживание и оттаивание

"тени митохондрий
осмртический шок в тех условиях
ЦБР, 16000%, | 40 мин

Остаточная наружная мембрана ч (не используется)
105000
Белки матрикса (на анализ)
60 мин

Внутренняя мембрана (на анализ)
СХЕМА ВЫДЕЛЕНИЯ И ФРАГМЕНТАЦИИ МИТОХОНДРИЙ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫС
осадок
супернатант