Разработка метода определения активности сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов как показателя адренергической регуляции в организме

• Автор: Хундерякова, Наталья Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 121 с. : ил.

ОГ ДАВЛЕНИЕ
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Роль янтарной кислоты в энергообеспечении.
1.1. Субстратно - гормональная система.
1.2. Переаминирование ЩУК - ГЛУ - динамичная основа реципрокной регуляции
1.3. Сигнальная роль янтарной кислоты в организме
1.4. Модели исследования разных уровней адренергической регуляции.
1.5. Устойчивое поддержание физиологической активации организма 20 животных и человека малыми дозами адреналина и янтарной кислоты.
1.6. Гиперактивация новорожденных как модель физиологической адренергической активации
1.7. Свойства и локализация сукцинатдегидрогеназы.
Глава 2. Методы оценки функционального состояния митохондрий.
2.1. Гистологический метод определения «красных рванных волокон»
2.2. Биохимический метод определения функциональной активности митохондрий.
2.3. Цитохимический метод Нахлас определения активности СДГ
2.4. Цитохимический метод Нахлас в модификации Нарциссова определения активности СДГ в лимфоцитах периферической крови
2.5. Активность СДГ лимфоцитов, как показатель состояния внутренних органов и развития организма в целом.
ЧАСТЬ II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Объекты исследования. 3
3.2. Забор крови у человека.
3.3. Создание разных состояний животного и эвтаназия.
3.4. Обработка, фиксация и окрашивание мазков крови нитросиним тетразолием
3.5. Микроскопирование и измерение площади окраски
3.6. Статистика.
ЧАСТЬ III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4. Разработка нового цитобиохимического метода измерения активности сукцинатдегирогеназы в митохондриях лимфоцитов.
4.1. Принцип подбора условий для выявления окисляющей янтарной кислоты в митохондриях на мазке крови
4.2. Различие состава инкубационных сред растворов по цитохимическим аналогам и по разработанному цитобиохимическому способу.
4.3. Влияние изменения величины pH 7,2 и 7,4 на активность СДГЛФ в присутствии 5мМ сукцината при разных физиологических состояниях животных

4.5. Влияние содержания 1мМ ЭДТА в среде инкубации на результаты измерения активности сукцинатдегидрогеназы в покое и при действии адреналина на животное
4.6. Выявление физиологической модуляции сукцинатдегидрогеназы в присутствии изолимонной кислоты у животных в разном физиологическом состоянии.
Глава 5. Применение цитобиохимического метода измерения активности сукцинатдегирогеназы на крысах.
5.1. Значение проб, выявляющих функциональную активность сукцинатдегидрогеназы. Расчет уровня эндогенной янтарной кислоты, истинной активности сукцинатдегидрогеназы
5.2. Измерение активности сукцинатдегидрогеназы у новорожденных крысят сравнительно с показателями взрослых крыс в покое и при активации адреналином
5.3. Изучение воздействия модулированной частоты 101 Гц от лазерного диода прибора Curator Professional на регуляцию превращений янтарной кислоты в лимфоцитах крыс.
Глава 6. Исследование взаимодействия ЯНТ с митохондриями условно здоровых добровольцев.
6.1. Четыре типа цитобиохимических паттернов (узоров) взаимодействия ЯНТ с митохондриями условно здоровых добровольцев
6.2. Пример описания паттернов здоровых добровольцев.
6.3. Пример выявления у людей разного уровня метаболических процессов (метаболическая гипертрофия)
6.4. Выделение групп условно здоровых людей по субстратному действию ЯНТ. Характеристика каждого типа паттерна
6.5. Значения показателей восстановления НСТ и истинной СДГЛФ у здоровых обследуемых
6.6. Повторные измерения активности СДГ у одного и того же человека
6.7. Сравнение активности СДГ лимфоцитов периферической и венозной крови условно здоровых людей.
Глава 7. Исследование взаимодействия ЯНТ с митохондриями в группе пациентов с пищевой аллергией и гипертонией.
7.1. Типы цитобиохимических паттернов у пациентов с пищевой аллергией и гипертонией и корреляция их с физиологическими параметрами.
Типы цитобиохимических паттернов пациентов по общей СДГДФ и действию ИЗЛ рис. 24
7.2. Типы цитобиохимических паттернов пациентов по истинной СДГЛФ и действию ИЗЛ рис. 25
7.3. Обсуждение сопоставления активности СДГЛФ крови с показателями интенсивности ГРВ у пациентов с пищевой аллергией в некоторых случаях с гипертонией.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ВВЕДЕННЫХ СОКРАЩЕНИЙ:
СДГ - сукцинатдегидрогеназа,
СДГЛФ - сукцинатдегидрогеназа лимфоцитов,
ЯНТ - янтарная кислота,
КГЛ - а - кетоглютаровая кислота НСТ - нитросиний тетразолий,
МАЛ - малоновая кислота,
ЭС - эндогенные субстраты,
ИЗЛ - изолимонная кислота,
ЩУК - щавелевоуксусная кислота АЦХ - ацетилхолин КХА - катехоламины КХА - катехоламины,
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота,
ЭГТА - этиленгликоль-бис-(2-аминоэтиловый эфир) - Гч[,1ЧГ,]М',М'-тетрауксусная кислота,
мМ - миллимоль,
Мм - молекулярная масса
мкМ - микромоль
МХ - митохондрия
ГРВ - газоразрядная визуализация,
АД - артериальное давление
ЧСС - частота сердечных сокращений
АДР - адреналин.
ГЦ г герц

активности без дополнительных воздействий. Несмотря на кажущуюся противоположность двух обнаруженных эффектов ИЗЛ в двух состояниях их механизм един (описано ниже).
Как отмечено на всех трех примерах влияния щелочного сдвига pH в интервале от 7,2 до 7,4, наличия ЭДТА и ИЗЛ видно, что эти воздействия включают механизмы активации кальциевого сигнала. Это приводит для лимфоцитов контрольного животного к активации, а для лимфоцитов возбужденного животного к ингибированию СДГ активности.
Таким образом, подбор условий эксперимента, позволяющих максимально сохранить состояние фермента в организме, дает возможность еще чувствительнее выявить ex vivo цитобиохимическими измерениями физиологическую модуляцию активности СДГ in vivo и увеличить информативность метода.
4.6. Значение проб, выявляющих функциональную активность СДГ. Расчет уровня эндогенной ЯНТ, «истинной» активности СДГ.
Для более полной характеристики состояния функциональной активности СДГ в организме вместо одной принятой пробы с субстратной концентрацией ЯНТ, мы проводили комплексное определение, включающее несколько проб, перечисленных ниже в том порядке, как мы их приводим на паттернах. Восстановление НСТ:
1. За счет окисления эндогенных субстратов (ЭС).
2. В присутствии 5мМ малоната - ингибитора СДГ (МАЛ).
3. В присутствии 5мМ ЯНТ (СДГ).
4. В присутствии 5мМ ЯНТ и 5мМ ИЗЛ (ИЗЛ).
Проба 3. В присутствии 5мМЯНТ (общая активность СДГ).
В цитохимии активность СДГ определяется как восстановление НСТ в пробе с добавлением субстратных мМ количеств ЯНТ, в нашем случае 5 мМ. Однако при этом не учитывается восстановление НСТ за счет других процессов, в частности, окисления НСТ всеми НАД-ЗС субстратами