Комплексный анализ системы Toll-подобных рецепторов при различных патологических состояниях человека

• Автор: Хорева, Марина Викторовна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 254 с. : 38 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение

ЧАСТЬ I. Обзор литературы

ГЛАВА I. Паттерн-распознающие рецепторы врожденного иммунитета

1.1. Характеристика паттерн-распознающих рецепторов

1.2. Характеристика ТоП-подобных рецепторов

1.2.1. Строение То11-подобных рецепторов

1.2.2. Функции То11-подобных рецепторов

1.2.3.Сигнальные пути То11-подобных рецепторов

1.2.4.Экзогенные лиганды То11-подобных рецепторов

1.2.5.Эндогенные лиганды То11-подобных рецепторов
1.2.6.Эндогенные лиганды в патогенезе заболеваний человека
1.2.7.Роль То11-подобных рецепторов в развитии патологии
То11-подобные рецепторы при иммунодефицитных заболеваниях 69 ТоП-под об ные рецепторы в развитии сердечно-сосудистых
заболеваний
То11-подобные рецепторы в развитии острого панкреатита
ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования
2.1. Характеристика групп обследованных больных
2.2. Реактивы
2.3. Методы исследования
2.3.1 .Оценка эффекторной функции ТШ
Выделение МНК из периферической крови человека
Культивирование МНК периферической крови человека
2.3.2. Определение концентрации цитокинов в культуральных
супернатантах методом иммуноферментного анализа
2.3.3.Оценка экспрессии ТЫ1 на моноцитах периферической
крови
2.3.4.Оценка экспрессии мРНК ТШ в МНК периферической
крови
2.3.4.1. Методы выделения РНК из МНК
2.3.4.2.Проведение реакции обратной транскрипции
2.3.4.3.Постановка ПЦР в реальном времени, метод ДАй
2.3.5. Статистическая обработка результатов
Результаты и обсуждение
ГЛАВА III. Оценка эффекторной функциональной активности
ТЕЯ на МНК периферической крови человека
3.1. Определение эффекторной функциональной активности ТЬЯ по выработке ФНОа

3.2.Исследование влияния лигандов TLR на выработку ИФНа
МНК здоровых людей
3.3 Оценка эффекторной функции TLR у здоровых людей разных возрастных групп
ГЛАВА IV. Анализ системы TLR у больных первичными
иммунодефицитами
4.1.Оценка эффекторной функции TLR на МНК больных ПИД с
дефектами антителообразования
4.1.1.Определение спонтанной продукции ФНОа МНК периферической крови больных ОВИН и Х-АГГ
4.1.2.Определение стимулированной лигандами TLR продукции ФНОа МНК больных ОВИН и Х-АГГ
4.1.3 .Исследование влияния лигандов Toll-подобных рецепторов на выработку ИФНа МНК больных ПИД с дефектами
антителообразования
4.1.4.Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на поверхности моноцитов периферической крови больных ПИД с дефектами
антителообразования
4.1.5.0ценка экспрессии мРНК TLR2 и TLR4 в МНК периферической крови больных ПИД с дефектами
антителообразования
4.2,Оценка показателей системы TLR в МНК периферической
крови детей с нейтропенией
4.2.1.Определение эффекторной функции TLR на МНК периферической крови больных нейтропенией
4.2.2.Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на поверхности моноцитов периферической крови больных нейтропенией
ГЛАВА V. Анализ системы TLR в МНК периферической крови больных при острых патологических состояниях,
сопровождающихся деструкцией ткани
5.1.Оценка компонентов системы TLR у больных острым
инфарктом миокарда
5.1.1.Оценка эффекторной функции TLR2 и TLR4 на МНК больных острым инфарктом миокарда
5.1.2. Изучение влияния rHSP70 на функциональную активность
TLR4 на МНК здоровых доноров и больных ОИМ
Исследование совместного действия лигандов TLR2 и TLR4 на выработку ФНО а МНК здоровых доноров in vitro

5.1.3.Особенности TLR индуцированной выработки ФНОа МНК
у отдельных больных ОИМ в динамике заболевания
5.1.4.Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на моноцитах больных острым инфарктом миокарда
5.2.Оценка компонентов системы TLR в мононуклеарных клетках периферической крови больных острым деструктивным
панкреатитом
5.2.1.Оценка эффекторной функции TLR2 и TLR4 у больных
ОДП в динамике заболевания
5.2.1.1.Определение спонтанной выработки провоспалительных
цитокинов у больных ОДП
Изучение влияния препарата Лорноксикам на опосредованную TLR 1/2 и TLR 4 выработку провоспалительных цитокинов МНК здоровых доноров in vitro
5.2.1.2.0пределение спонтанной выработки провоспалительных
цитокинов у больных, получающих Лорноксикам
5.2.1.3,Определение индуцированной лигандами TLR2 и TLR4 выработки провоспалительных цитокинов МНК больных ОДП
5.2.2.Оценка экспрессии TLR2 и TLR4 на моноцитах больных ОДП в динамике заболевания
5.2.3. Анализ экспрессии мРНК TLR2 и TLR4 в мононуклеарных клетках больных ОДП
5.2.4.Изменения показателей в системе TLR у больных ОДП с развитием гнойно-деструктивных осложнений
ГЛАВА VI. Заключение
Выводы
Список литературы

формирования клеточного стресса, фиброза, апоптоза и некроза. Именно поэтому сейчас всё больше внимания уделяется связи ТЫЛ и различных воспалительных заболеваний. Как уже было сказано, активация ТЫЛ запускает синтез эффекторных молекул (про- и противовоспалительные цитокины, хемокины, воспалительные медиаторы). Нарушение регуляции активности ТЫ1 может приводить к развитию неконтролируемого воспаления, что влияет на течение и прогрессирование воспалительных заболеваний [249,250,308]. Таким образом,ТЫЛ играют важную роль в развитии острых и хронических воспалительных заболеваний, таких как инфаркт миокарда, деструктивный панкреатит, цирроз печени, атеросклероз, аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка), аллергических заболеваний, онкологических заболеваниях [255,293,302,327,343,346]. ТЫЛ вовлечены в процесс острого отторжения трансплантата, так как их активация может нарушить формирование толерантности [306].
В ответ на эндогенные лиганды ТЫЛ могут участвовать в процессах регенерации тканей, например, в регенерации ткани печени, заживлении ран [309,414]. Активация ТЫЛ способствует ангиогенезу и при экзогенной, и при эндогенной стимуляции, хотя точный механизм данного процесса на сегодняшний день не до конца понятен [220].
ТЫЛ (ген локализован на 4р14 хромосоме) экспрессируется в высокой степени на клетках селезенки и клетках периферической крови [193]. Прямые лиганды для ТЫЛ рецепторов не выявлены и их функция остается до конца неясной. Возможно, они действуют как корецепторы. Показано, что в комплексе с ТЫ12 рецепторами они участвуют в ответе на триацилированные липопротеины [406].
ТЫЛ или СП282 (4цЗ 1.3-32) рецепторы вовлечены в распознавание продуктов грамположительных бактерий, микобактерий, дрожжей. Исследования на мышах, дефектных по ТЫТ2 гену, позволили сделать вывод о важной роли ТЫЛ в реагировании на пептидогликаны [90]. ТЫЛ рецепторы могут образовывать гетеродимеры с другими ТЫ1 или другими