Фармакологическое изучение наносомальной формы паклитаксела на высокорезистентных клетках Т-лимфобластного лейкоза человека JURKAT WT

• Автор: Боят Ваня
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с. : ил.

Содержание

Список основных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика паклитаксела

1.2. Лекарственные формы паклитаксела

1.3. Системы доставки лекарственных веществ

1.3.1. Классификация и общая характеристика наночастиц

1.3.2. Наночастицы на основе сополимеров молочной и гликолевой ки- 26 слот

1.4. Множественная лекарственная устойчивость опухолевых клеток и 27 пути ее преодоления

1.4.1. Характеристика системы Р-гликопротеина

1.5. Модификации наночастиц с использованием ПАВ
1.5.1. Полоксамер 188 (Pluronic ® F68) как ингибитор Р-гликопротеина
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Технология получения наночастиц из сополимеров молочной и гли- 46 колевой кислот
2.1.1. Реактивы и лабораторное оборудование
2.1.2. Методы получения наночастиц
2.1.3. Определение характеристик наночастиц на основе PLGA
2.2. Клеточная культура
2.2.1. Клеточная линия и питательная среда
2.3. Микроскопическое исследование внутриклеточного накопления на- 56 ночастиц
2.4. Оценка цитотоксической активности in vitro
2.4.1. Оценка цитотоксической активности в МТТ тесте
2.4.2. Оценка цитотоксической активности в ЛДГ тесте
2.4.3. Оценка цитотоксической активности в АТФ тесте
3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Разработка наносомальной лекарственной формы паклитаксела на
основе сополимера молочной и гликолевой кислот
3.1.1. Получение наночастиц с паклитакселом методом гомогенизации
3.1.2. Получение наночастиц с паклитакселом методом замены раство- 62 рителя (соосаждения)
3.2. Методы анализа наносомальной лекарственной формы паклитак- 65 села на основе сополимеров молочной и гликолевой кислот
3.2.1. Тест замораживания-оттаивания
3.2.2. Определение размера и стабильности наночастиц
3.2.3 Количественное определение паклитаксела в наносомальной 70 форме
3.2.4 Тест высвобождения паклитаксела из наночастиц in vitro
3.3. Микроскопическое исследование внутриклеточного накопления 77 наночастиц в клетках 1игка1 ¥Т
3.4. Определение цитотоксической активности различных форм пакли- 78 таксела
3.4.1. Цитотоксический эффект различных форм паклитаксела
полученный в МТТ тесте
3.4.2. Цитотоксический эффект различных форм паклитаксела
полученный в ЛДГ тесте
3.4.3. Цитотоксический эффект различных форм паклитаксела
полученный в АТФ тесте
4. ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
PLGA - сополимер молочной и гликолевых кислот JIB - лекарственное вещество
МЛУ - множественная лекарственная устойчивость
MRP - белок полирезистентности
P-gp - Р-гликопротеин
ИКС- протеинкиназа С
НЧ - наночастицы
ПАВ - поверхностно-активное вещество
ГЭБ — гематоэнцефалический барьер
ПЕГ, ПЕО - полиэтиленгликоль, полиэтиленоксид
ЕО, РО - этиленоксид, пропиленоксид
ККМ - критическая концентрация мицелообразования
ГЛБ — гидрофильно-липофильный баланс
ГТС — глутатион-S- трансфераза
РФК - реактивные формы кисларода
ДМСО - диметил сульфоксид
МТТ - 3-(4,5-диметилтриазол-2-ил)2,5-дифенил-2-Н-тетразолия бромид РТХ - паклитаксел
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ИК50 - ингибирующая концентрация РЭС - ретикулоэндотелиальная система СФ - спектрофотометрия
ФКС - фотонная корреляционная спектроскопия AUC - area under curve
EPR- Enhanced permeability and retention effect (эффект повышенной проницаемости капилляров)
БКС - биофармацевтическая классификационная система ЛДГ - лактатдегидрогеназа

Родамин
В. P-gp ингибиторы (вещества, которые блокируют P-gp-опосредованный
транспорт)
Иммуносупрессоры Антиэстрогенные противоопухо-
Циклоспорин А, валсподар левые препараты
Тамоксифен
Блокатор кальциевых каналов
Всрапамил Антиаритмические препараты
Хинидин
Противогрибковые препараты
Кетоконазол
Седативные препараты
Мидазолам
Активность P-gp зависит от пути сигнальной трансдукции и связана с протеинкиназой С (ПКС). ПКС фосфорилирует P-gp, а гиперстимуляция ИКС приводит к P-gp вызванному движению субстрата. Ингибиторы ПКС являются основными токсическими соединениями в высокорезистентных клетках, вырабатывающих P-gp, тем не менее, известно что ПКС ингибиторы взаимодействуют напрямую с P-gp.
Несмотря на мощную цитотоксическую активность паклитаксела in vitro, клиническая эффективность у большой группы пациентов отсутствует в следствии МЛУ к паклитакселу [112]. Тривиальным способом преодолеть эти препятствия и повысить эффективность лечения является увеличение дозы ЛВ. При этом терапевтический эффект часто достигается ценой повышения неспецифической токсичности. Актуальность этой проблемы послужила стимулом для разработки подходов к созданию разнообразных систем направленной доставки JIB, в частности наночастиц. К настоящему времени можно считать доказанным, что включение цитостатиков в НЧ может существенно изменять их профиль распределения организме, повысить эффектив-