Возможности определения прижизненности и давности образования резаных ран методом атомно-силовой микроскопии

• Автор: Белоусова, Ольга Дмитриевна
• Шифр специальности: 14.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 97 с. : 26 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИЖИЗНЕН-НОСТИ И ДАВНОСТИ ОБРАЗОВАНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Основные направления изучения прижизненности и давности образования повреждений
1.2. Исследование морфологических характеристик и физикохимических параметров эритроцитов в биологии и медицине

1.3. Сканирующая зондовая микроскопия в биологии и медицине

1.4. Исследование эритроцитов методом атомно-силовой микроскопии

1.5. Подготовка проб крови для проведения атомно-силовой микроскопии

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал исследования
2.2. Методы исследования
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Особенности подготовки проб крови для исследования морфологических параметров и структуры мембран эритроцитов методом атомно-силовой микроскопии
3.2. Изучаемые морфологические параметры эритроцитов
3.3. Сравнительный анализ значений величин изучаемых параметров эритроцитов
3.4. Математическое моделирование диагностики прижизненности образования повреждений
3.5. Математическое моделирование диагностики давности образования прижизненных повреждений
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Одним из приоритетных вопросов судебно-медицинской экспертной практики является необходимость установления прижизненности и давности образования повреждений. Характеризуя наиболее перспективные научные проблемы судебно-медицинской науки Д.В. Богомолов (2006), B.J1 Попов (2011) считают, что главным в решении указанной проблемы является поиск новых подходов и методов исследования, которые позволяют существенно повысить точность диагностики прижизненности и давности травмы. Высокие требования к качеству судебно-медицинской диагностики и достоверности её результатов в настоящее время вызывают необходимость постоянного поиска новых диагностических «инструментов» (Maeda H. et al., 2009; Luna A., 2009; Maeda H. et al., 2011; Bremmer R.H. et. al., 2012) необходимых для решения поставленных экспертных задач.
Поиск ответов на вопросы о прижизненности и давности образования повреждений находится в области достаточно традиционных методов морфологических исследований. Наряду с гистологическим методом, предпринимаются попытки применять гистохимический,
иммуногистохимический, биохимический и биофизический методы. Однако многие ученые сходятся во мнении, что ни один из предложенных методов не может быть использован самостоятельно, и приоритет остается за комплексным исследованием объектов экспертизы (Пиголкин Ю.И. с соавт., 2001).
Традиционно наиболее широкое распространение в судебно-медицинской практике получил гистологический метод, как наиболее информативный и объективно отражающий изменения клеток и тканей. При этом ведущую роль в диагностике прижизненности и давности образования повреждений имеет оценка выраженности неспецифических реактивных и репаративных реакций в области повреждений, а также регионарных и общих ответных реакций

организма на травму (Науменко В.Г., Митяева H.A., 1980; Пермяков A.B. с соавт., 1994).
Особые трудности при решении вопросов прижизненности и давности образования повреждений возникают при дифференциальной диагностике прижизненных повреждений от посмертных, если они нанесены в ранние сроки (первые часы) премортального, или постмортального периодов. Это обусловлено тем, что реактивные изменения тканей в области прижизненной травмы не успевают развиться в полной мере, а также тем, что в посмертных повреждениях в связи с «переживаемостью» тканей возможно появление морфологических изменений, схожих с прижизненными (Попов В.Л., 1996).
С развитием сканирующей зондовой микроскопии, в частности атомносиловой микроскопии, в арсенале исследователей появилась возможность изучать морфологические и локальные свойства поверхности твердого тела с высоким пространственным разрешением. При этом применение метода атомно-силовой микроскопии предоставляет возможность исследовать биологические объекты, не используя сложных методов фиксации. В доступной литературе имеется множество публикаций, демонстрирующих эффективность метода атомно-силовой микроскопии как аналитического инструмента, используемого в медицине.
Система крови - одна из важнейших гомеостатических систем организма. Возникающие в ней патологические процессы могут быть как проявлениями критических и терминальных состояний, так и причинами развития последних. Именно поэтому клетки крови, и в первую очередь эритроциты, являются постоянным объектом медицинских исследований. В судебно-медицинской литературе имеются лишь единичные публикации об использовании атомносиловой микроскопии как инструмента для определения давности смерти (Chen Y., Cai J., 2006) и давности «образования» пятен крови (Strasser S.et al., 2007).
В то же время, в доступных литературных источниках приведены различные сведения о методике подготовки образцов для исследования эритроцитов методом атомно-силовой микроскопии. До сих пор не

2.2.1. Метод атомно-силовой микроскопии
Исходя из стандартизированного определения, под нанообъектом понимается объект, содержащий структурные элементы, геометрические размеры которых хотя бы в одном измерении не превышают 100 нм (Реестр ИСО НТК № 229 по нанотехнологиям).
В работе использовался атомно-силовой микроскоп INTEGRA AURA («NT MDT», Россия) (рис. 1).
Рис. 1. Основные узлы атомно-силового микроскопа INTEGRA AURA
(«NT MDT», Россия).
В основе работы атомно-силового микроскопа лежит регистрация силового взаимодействия между поверхностью исследуемого образца и зондовым датчиком (регистрируются силы Ван-дер-Ваальса, упругие силы и силы адгезии).