Комбинированные криоконсерванты в сохранении функций лейкоцитов

• Автор: Полежаева, Татьяна Витальевна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Сыктывкар
• Количество страниц: 200 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ВЛИЯНИИ ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ТЕМПЕРАТУР НА СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КЛЕТОК (обзор литературы)

1.1 Факторы криоповреждения и криозащиты клеток.

Гипотезы, теории, концепции

1.2 Криопротекторы и криоконсерванты

1.3 Методы оценки функционального состояния клеток, подвергнутых криовоздействию

1.4 Методы криоконсервирования лейкоцитов

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика объекта исследования

2.2 Разработка новых комбинированных криозащитных растворов, обеспечивающих сохранность лейкоцитов при различных отрицательных температурах
2.3 Методы исследования физико-химических свойств криозащитных растворов
2.4 Биологические методы исследования криозащитных растворов
2.5 Разработка программ замораживания и отогрева лейкоцитов
2.6 Методы оценки структурно-функционального состояния лейкоцитов, подвергнутых воздействию отрицательных температур
2.7 Методы статистического анализа
ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Структурно-функциональные показатели лейкоцитов,

перенесших воздействие температуры переохлаждения
(-10°С)
3.2 Структурно-функциональные показатели лейкоцитов,
перенесших воздействие субумеренно-низкой температуры
(-20°С)
3.3 Структурно-функциональные показатели лейкоцитов,
перенесших воздействие умеренно-низкой температуры
(-40°С)
3.4 Структурно-функциональные показатели лейкоцитов,
перенесших воздействие низкой температуры (-80°С)
3.5 Физико-химические и биологические свойства
эффективных криозащитных растворов
ГЛАВА IV ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1,2-ПД - пропандиол или а-пропиленгликоль АОА - антиоксидантная активность АФК - активные формы кислорода
А-378 или ГМБТОЭМ - гексаметиленбистетрагидроксиэтилмочевина
ГМФШ - гексозомонофосфатный шунт
ГЭК - гидроксиэтилкрахмал
ДМАЦ - диметилацетамид
ДМСО - диметилсульфоксид
ЛД 50 - средняя летальная доза
ЛК - лейкоконцентрат
ЛКБ - лизосомально-катионные белки
НАДФ - никотинамиддинуклеотидфосфат
НСТ - нитросиний тетразолий
ОМЭПС - сукцинат гидроксиметилэтилпиридина
ПВП - поливинилпирролидон
ПОЛ - перекисное окисление липидов
ПЭО-400 - полиэтиленоксид с молекулярной массой
СЦК - средний цитохимический коэффициент
ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов

Пропиленгликоль (1,2-ПД). Эндоцеллюлярный криопротектор с м.м. 76. СзН802. Впервые описан в 1987 г (Воротилин А.М., 1987). Являясь двухатомным спиртом, легко проникает в клетки и за счет своих функциональных групп (-ОН; СН3+-) связывает фракции свободной и связанной воды, тем самым снижает эвтектическую температуру замерзания и способствует формированию мелкозернистых кристаллов льда. Кроме того, он связывает и соли, защищая мембраны от гиперосмотического шока. Обнаружен в мозге крыс, мышечной ткани кролика. В организме подвергается распаду до лактата. Обладает слабым антиоксидантным и антибактериальным свойствами. Используется (Вильянинов В.H., 1997; Чечеткин A.B. и др., 2005) для консервирование эритроцитов при -80°С и -140°С в конечной концентрации 18,5%-й раствор ПД в смеси с 5%-м ДМАЦ; или в концентрации 7% при криоконсервировании репродуктивных клеток животных (Белоус А.М., Грищенко В. И., 1994). Применяется также как основа гидрофобных мазей, растворитель лекарственных средств.
Тексометиленбистетрагидроксиэтилмочевина (ГБТОЭМ или вещество А-378) - криопротектор смешанного действия (Сведенцов Е.П., 1987, 2010). Молекулярная масса 378. (HOCH2CH2)2NCONH(CH2)6
NHCON(CH2 СН2ОН)2. Представляет собой мелкокристаллическое вещество белого цвета без запаха, горьковато-сладковатого вкуса, хорошо растворимое в воде, а при нагревании - в метаноле, этаноле, хлороформе, четыреххлористом углероде. Температура плавления +89° -г- +91°С. Водные растворы ГМБТОЭМ (10-40%) прозрачны, имеют рН=7,8-7,9. Обладает выраженным хладоограждающим действием, образует прочные связи с внеклеточной водой, замедляет скорость образования кристаллов и изменяет их структуру. Точка эвтектики 15-25% водных растворов составляет -8,1°. Взаимодействует с мембраной клеток, следствием чего является повышение ее устойчивости к повреждающему действию кристаллов, тем самым, проявляя экзоцеллюлярное воздействие. Так же он оказывает и эндоцеллюлярное воздействие: проникает в клетку, связывает воду,